蛋白质的沉淀

三、蛋白质的沉淀

蛋白质从溶液中以固体状态析出的现象称为蛋白质的沉淀。它的作用机制主要是破坏了水化膜或中和蛋白质所带的电荷。沉淀出来的蛋白质，根据实验条件，可以是变性或不变性。其主要沉淀方法如下。

（一）盐析法

在蛋白质溶液中加入高浓度的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）破坏蛋白质的胶体稳定性，使蛋白质从溶液中沉淀出来，称为盐析。它的机制是高浓度的盐溶液中的异性离子中和了蛋白质颗粒的表面电荷，从而破坏了蛋白质颗粒表面的水化层，失去了蛋白质胶体溶液的稳定因素，降低了溶解度，使蛋白质从水溶液中沉淀出来。盐析所得蛋白质加水稀释尚可复溶。盐析时，若把溶液pH值调节至该蛋白质的等电点，则沉淀效果更好。根据各种蛋白质的颗粒大小、亲水性的程度不同，在盐析时需要盐的浓度也不一致。因此，调节中性盐的浓度，可使蛋白溶液中的几种蛋白质分段析出，这种方法称分段盐析法。临床检验中常用此法来分离和纯化蛋白质。盐析法一般不引起蛋白质变性，是分离纯化蛋白质的常用方法之一。

（二）重金属盐沉淀蛋白质

蛋白质可以与重金属离子（如汞、铅、铜、锌等）结合生成不溶性盐而沉淀。此反应的条件是溶液的pH值应稍大于该蛋白质的等电点，使蛋白质带较多的负电荷，易与带正电荷的重金属离子结合。

临床上常用蛋清或牛乳解救误服重金属盐的病人，目的是使重金属离子与蛋白质结合而沉淀，阻止重金属离子的吸收。然后，用洗胃或催吐的方法，将含重金属离子的蛋白质盐从胃内清除出去，也可用导泻药将毒物从肠管排出。

（三）某些酸类沉淀蛋白质

蛋白质可与钨酸、苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、磺柳酸等发生沉淀。反应条件是溶液的pH值应小于该蛋白质的等电点，使蛋白质带正电荷，与酸根负离子结合生成不溶盐而沉淀。生化检验中常用钨酸或三氯醋酸作为蛋白沉淀剂，以检查尿蛋白或制备无蛋白血滤液。

（四）有机溶剂沉淀蛋白质

乙醇溶液、甲醇、丙酮等有机溶剂可破坏蛋白质的水化层，因此，能发生沉淀反应。如把溶液的pH值调节到该蛋白质的等电点时，则沉淀更加完善。在室温条件下，有机溶剂沉淀所得蛋白质往往已发生变性。若在低温（0～4℃）条件下进行沉淀，则变性作用进行缓慢，故可用有机溶剂在低温条件下分离和制备各种血浆蛋白。此法优于盐析，因不需透析去盐，而且有机溶剂很易通过蒸发去除。

议一议：

使蛋白质沉淀的方法有哪些？蛋白质的变性与沉淀有什么关系？

乙醇溶液作为消毒剂，作用机制是使细菌内的蛋白质发生变性沉淀，而起到杀菌作用。