物理方法灭菌

一、物理方法灭菌

（一）火焰灭菌

将微生物接种工具等在酒精灯火焰上灼烧以达到灭菌的目的。如接种工具中的接种环、接种针及其他金属用具就可以直接在酒精灯火焰上灼烧灭菌。此外，在接种时，也必须把试管口、锥形瓶口、培养皿等放在酒精灯火焰外侧灼烧以达到无菌操作的目的。

（二）干热灭菌

干热灭菌是用干燥热空气杀灭微生物的方法。把待灭菌的物品包好后放入干燥箱中，在60～170℃的温度下加热1～2h。干热灭菌常用于空玻璃器皿和金属器具灭菌操作中。

1.具体步骤

（1）包扎。玻璃器皿在灭菌前要正确地包扎和加塞，以保证灭菌后不被外界杂菌污染。

（2）装箱。将包扎好的器具放入干燥箱中，注意不要摆放得太密，要保持空气流通。

（3）灭菌。接通电源，打开排气阀，待温度升高到80～100℃后关闭排气阀，等温度升到60～170℃时开始计时保持1～2h。

（4）灭菌结束。断开电源，使温度降至50～60℃，再打开灭菌箱门，取出物品备用。

2.注意事项

（1）灭菌的玻璃器皿内不能有水，如果有水，在干热灭菌时容易炸裂。

（2）灭菌物品不能放得太多、太挤，以免受热不均匀，使得灭菌不充分。

（3）灭菌物品不能直接放在底板上。

（4）灭菌温度以160～170℃为宜，温度太高，棉花和报纸会烧焦。

（5）灭菌结束等到灭菌箱的温度降到60℃以下后，才可以打开灭菌箱。

（三）湿热灭菌

湿热灭菌是利用热蒸汽灭菌，水蒸气的穿透力比热空气强，因此，其灭菌效果较好。

1.常压蒸汽灭菌

（1）巴氏消毒。把液体放在较低的温度下消毒，既可以杀死液体中致病菌的繁殖体，又不会破坏液体中的成分，一般在60～85℃下处理15～30min，常用于牛奶、啤酒等食品的灭菌。

（2）煮沸消毒法。许多器械，如手术刀、剪刀和镊子等可直接在水中煮沸消毒，将水煮沸5～30min即可杀死细菌的营养体，而要杀死芽孢则须煮1～2h。

（3）蒸汽持续灭菌法。在较大的蒸锅中进行，从蒸汽大量产生时加大火力保证有充足的蒸汽，待温度达到100℃后计时持续加热3～6h，能够杀死绝大部分的芽孢和全部营养体。

（4）间歇灭菌法。常用于不耐热的培养基的灭菌，培养基在100℃下蒸煮30～60min可以杀死微生物的营养体。

2.高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在盛有水且密闭的高压蒸汽灭菌锅中，打开排气阀，将锅内的水煮沸，待锅中原有的冷空气彻底除尽后，关闭排气阀，再继续加热使锅内的蒸汽压上升，从而温度也会跟着上升，当蒸汽压达到103.4kPa时，水蒸气的温度上升到121℃，经过25～30min的加热过程就可以起到很好的灭菌效果。高压蒸汽灭菌锅有立式、卧式及手提式等不同类型。