四、研究基因及基因活性的分子工具
1.作图说明DNA凝胶电泳的原理。大致比较150bp，600bp，1200bpDNA的电泳迁移率。
2.一个双链DNA片段在电泳实验图中的迁移率为30mm，该段DNA大约有多少bp？
3.比较蛋白质研究中SDS-PAGE和双向凝胶电泳的异同。
4.简述离子交换层析的原理。作图说明使用该方法分离三种不同蛋白质的过程。
5.简述凝胶过滤层析的原理。作图说明使用该方法分离三种不同蛋白质的过程，并在图上指出最大和最小的蛋白质。
6.比较放射自显迹法和phosphorimaging的原理。哪种方法更适合作定量分析？
7.简述一种凝胶电泳中用于某特定核酸片段的非放射性检测方法。
8.作图说明Southernblotting以及探针检测目的DNA的过程。该方法与Northernblotting有何异同？
9.简述使用微卫星探针(minisatelliteprobe)的DNA指纹分析方法。并与现代法医学中用探针检测单变异DNA位点的DNA分型方法进行比较。
10.Northernblotting的结果可以给出什么信息？
11.简述荧光原位杂交技术(FISH)的原理。在什么时候选择该方法，而非Southernblotting？
12.比较Maxam-Gilbert测序法和Sanger测序法的差异。
13.画一幅Sanger法测序的放射显影图，并指出相应的DNA序列。
14.如何使DNA测序自动化？
15.如何用限制性酶切作图法鉴定连接到载体中的DNA限制性酶切片段的方向？选择不同于本章中大小的DNA片段。
电泳胶分析DNA片段大小，(a)商业化的片段电泳后拍照片，(b)有关DNA片段迁移和片段大小的图表，DNA片段电泳迁移率和片段大小的对数值成比率，需要注意到大的DNA片段是偏离这个比率的，实线(实际的结果)和虚线(理论的结果)是不同的，这也表明了传统的电泳方法检测大的DNA片段的局限性。
16.解释定点诱变的原理，并简述其过程。
17.比较S1作图法和对mRNA5ˊ端作图的引物延伸法(primerextension)的异同。这两种方法中，哪种可以用于对mRNA3ˊ端作图？另一种为什么不行？
18.简述终止转录法(run-offtranscription)的原理。为什么该方法和S1作图、引物延伸法一样都不能在体内转录中进行？
19.如何标记双链DNA的5ˊ端？3ˊ端呢？
20.简述核酸连缀分析法(run-onassay)，并与终止法(run-offassay)进行比较。
21.斑点印迹与Southernblotting有何不同？
22.简述使用报告基因研究启动子活性的方法。
23.简述研究DNA与蛋白质结合的滤纸结合测试实验(filter-bindingassay)。
24.比较研究DNA-蛋白质相互作用的凝胶迁移法(gelmobilityshift)和DNase足迹法(DNasefootprinting)之异同。DNase足迹法可以提供哪些凝胶迁移法得不到的信息？
25.比较DMS与DNase足迹法。为何前者较后者更为精确？
26.简述构建基因敲除小鼠的方法。解释胸苷激酶和新霉素在该过程中的重要性。基因敲除小鼠可以提供哪些信息？
27.设计一个Southernblotting实验检测嵌合小鼠DNA中是否插入了新霉素抗性基因。可以假定目标基因和neor基因含有任意的酶切位点。显示成功插入和非成功插入的实验结果。
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