蛋白质的分离纯化，你了解多少？

分离纯化

分离纯化主要利用一种蛋白质和其他物质之间的物理的、化学的以及生物学方面的不同特性来实现。这些特性包括蛋白质的溶解度、分子形状和分子大小、电离性质以及不同的生物功能等。

利用溶解度不同

利用蛋白质在不同盐浓度、不同种类或不同浓度的有机溶剂、不同的pH值时溶解度不同的性质而达到蛋白质的分离纯化的目的。通常使用的中性盐沉淀称盐析法。最常用的盐是硫酸铵，最常用的有机溶剂是酒精和丙酮。

利用蛋白质分子形状和大小不同

蛋白质的分子量可以从5000左右开始一直到数百万。由于所有蛋白质的元素组成相似，因而分子量大的蛋白质，其体积也比较大。利用这一差别来分离蛋白质的方法包括分子筛、超过滤及超速离心等技术。

利用蛋白质电离性质不同

蛋白质的可电离基团有羧基、氨基、咪唑基、胍基和酚基等。蛋白质在不同pH下的带电情况是这些可电离基团电离情况的总结果，在不同的酸碱度时，它们的电离情况不同。在某一酸碱度时，某一蛋白质所带的正电荷和负电荷正好相等，这一酸碱度就是这一蛋白质的等电点，大部分球状蛋白质在等电点时的溶解度也非常小。由于电离基团的组成以及它们在分子中暴露情况不同，在一定条件下各种蛋白质的带电情况是不同的，这就是利用蛋白质的电离性质不同而达到分离目的的重要依据。

利用蛋白质带电性质的不同的分离方法主要有电泳及离子交换层析两类。

利用生物功能专一性——亲和层析法

很多蛋白质有专一的生物功能，并常通过与其他蛋白质或小分子（称为配体）特异而非共价的结合来发挥功能，例如酶和底物或抑制剂、抗原和抗体、激素和受体等。亲和层析的基本原理是把待提纯的某一蛋白质的配体，通过适当的化学反应共价地结合到琼脂糖一类的多糖颗粒表面的官能团上，当含有待提纯的蛋白质混合样品加到这种多糖材料的层析柱上时，待提纯的蛋白质与其特异的配体相结合，因而被“吸附”在配体的载体——琼脂糖颗粒的表面，而这类多糖颗粒在其他性能方面则允许不与配体特异结合的蛋白质或其他的物质自由通过，因而可以把欲提纯的蛋白质和其他物质分开。