【摘要】:定点突变是指通过PCR等方法向目的DNA片段中引入包括碱基的添加、删除或者点突变等过程。定点突变在研究蛋白质结构和功能以及改造基因中发挥着重要的作用。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入,可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构。在植物发育生物学研究领域,定点突变技术常常用于分析基因关键结构域中关键碱基对于功能的决定性作用。
定点突变获得突变体的方法_植物发育生物学实
第三节 定点突变获得突变体的方法
定点突变是指通过PCR等方法向目的DNA片段中引入包括碱基的添加、删除或者点突变等过程。定点突变在研究蛋白质结构和功能以及改造基因中发挥着重要的作用。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入,可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构。对突变基因的表达产物进行研究有助于了解蛋白质结构和功能的关系,探讨蛋白质的结构和结构域。定点突变技术应用于基因改造最直接的例子就是GFP。野生型的绿色荧光蛋白(wtGFP)在紫外光激发下仅能发出微弱的绿色荧光,经过对其发光结构域的特定氨基酸进行定点改造后,目前采用的GFP能在可见光的波长范围内被激发(吸收区红移),而且发光强度比原来强上百倍。
定点突变技术在科学研究领域得到了诸多应用,如研究蛋白质相互作用位点、酶的动力学特性,改造启动子或者DNA作用元件,研究蛋白质的晶体结构以及药物研发和基因治疗等方面。在植物发育生物学研究领域,定点突变技术常常用于分析基因关键结构域中关键碱基对于功能的决定性作用。
Stratagene公司的QuikChange Site-directed Mutagenesis kit和Clontech公司的Transformer Site-Directed Mutagenesis Kit是实验室常用的获得基因单位点突变的方法,这两种方法各有优缺点。
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