细胞同步化

三、细胞同步化

细胞同步化（synchronization）是在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化，前者称自然同步化，后者称为人工同步化。

（一）自然同步化

1．多核体　如黏菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达10⁸，体积达5～6cm³。疟原虫具有类似的情况。

2．某些水生动物的受精卵　海胆卵可以同时受精，最初的3次细胞分裂是同步的。大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。

3．增殖抑制解除后的同步分裂　真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。

（二）人工同步化

1．选择同步化

（1）有丝分裂选择法　使单层培养的细胞处于对数增殖期，分裂活跃，MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，可获得一定数量的中期细胞。此法操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，但获得的细胞数量较少（分裂细胞占1％～2％）。

（2）细胞沉降分离法　不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。可用于任何悬浮培养的细胞，但同步化程度较低。

2．诱导同步化

（1）DNA合成阻断法选　用DNA合成抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响其他时

期细胞的运转，将细胞群阻断在S期或G／S交界处。5－氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、高浓度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使细胞同步化。其中高浓度TDR对S期细胞的毒性较小，因此常用TDR阻断法诱导细胞同步化：

在细胞处于对数生长期时加入过量TDR（HeLa，2mol／L；CHO，7．5mol／L）。S期细胞被抑制，其他细胞继续运转，最后停在G₁／S交界处。

移去TDR。洗涤细胞并加入新鲜培养液，细胞又开始分裂。当释放时间大于T_S时，所有细胞均脱离S期，再次加入过量TDR，细胞继续运转至G₁／S交界处，被过量TDR抑制而停止。

此法同步化程度高，适用于任何培养体系。可将几乎所有的细胞同步化。但产生非均衡生长，个别细胞体积增大。

（2）中期阻断法　利用破坏微管的药物将细胞阻断在中期，常用的药物有秋水仙素和秋

水仙酰胺，后者毒性较少。无非均衡生长现象，但可逆性较差。