常用电泳分析技术

(一)醋酸纤维素薄膜电泳

醋酸纤维素薄膜电泳(CAE)是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的一项电泳技术。醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,将其制成的薄膜,称为醋酸纤维素薄膜,简称醋纤膜。醋酸纤维素几乎不带电荷,吸附作用和电渗作用都很微弱。醋纤膜微孔细小,质地致密,标本电泳速度快,区带整齐,分辨率高,几乎无拖尾现象。它不与染料着色,漂洗时染料易脱去,背景白净,区带易于观察。经冰醋酸-乙醇溶液透明可进行扫描分析,电泳区带可长期保存。

CAE适用于血清蛋白、血浆脂蛋白、甲胎蛋白、同工酶和核酸等分离分析。

(二)琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳(AGE)是以琼脂糖凝胶作为支持物的一种电泳技术。琼脂糖是由琼脂分离纯化而得,其化学组成为D-半乳糖和3,6-脱水L-半乳糖。由于去除了硫酸根和羟基基团的琼脂胶,因此吸附作用和电渗作用大为降低;又因含水量大,近似自由电泳,故电泳速度快,区带分离清晰、整齐,是一种较好的电泳支持介质。琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外灯检测及定量测定;琼脂糖不与染料结合,染色后背景染料容易洗脱;凝胶可干燥制成薄膜,结果可长期保存。

AGE适用于血浆脂蛋白、免疫球蛋白、同工酶和核酸等分离。

(三)聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(Acr)单体和甲叉双丙烯酰胺(Bis)双体在催化剂(过硫酸铵)和加速剂(四甲基乙二胺,TEMED)作用下聚合交联而成的三维网状结构凝胶。由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,可根据待分离物质的分子大小,在聚合前调整各单体的浓度比,选择最合适的凝胶成分,使之有适宜的孔径和较好的机械性能。凝胶中富含酰胺键,亲水性强;在溶液中不电离、不带电荷,吸附作用和电渗作用很小;而且对热的稳定性很好,受p H的影响较小;可以通过改变交联度调节孔径大小范围,凝胶无色透明,易于观察,能准确分离各蛋白质的组分,是一种理想的电泳支持物。

PAGE适用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、鉴定和定量,也可用于分子量和等电点的测定。