血清尿酸测定

尿酸是嘌呤核苷酸代谢的终产物,主要经肾排泄。血尿酸经肾小球滤过后,绝大部分(90%以上)被近端小管重吸收。因此尿酸的肾清除率很低,血清尿酸(serum uric acid,SUA)浓度增高的原因之一是由于肾排出尿酸减少所致。尿酸的溶解度很低,当血尿酸浓度超过参考区间时,可沉积于关节、软骨、软组织和肾等处,形成反复发作的痛风性关节炎,或在泌尿道沉淀形成结石。

血尿酸的测定方法主要有磷钨酸还原法和尿酸氧化酶法。磷钨酸还原法是将样本制成无蛋白滤液,具有还原性的尿酸在碱性环境中使磷钨酸还原成蓝色的钨蓝,在660nm处比色测定。此法特异性不高,灵敏度低,显色不稳定。目前血清尿酸的测定方法主要是尿酸氧化酶法。高效液相层析法测定尿酸,快速、灵敏、特异,可作为参考方法。

尿酸氧化酶偶联比色法

【原理】 尿酸在尿酸氧化酶氧化下,生成尿囊素和H 2 O 2,后者与2-羟-3,5二氯-苯磺酸(DHBS)和4-AAP,在过氧化物酶(POD)催化下,缩合成红色的醌亚胺化合物(Trinder反应),其颜色的深浅与尿酸的浓度成正比。反应式如下

尿酸+O2+H 2 O®尿囊素+CO2+H 2 O2

2H 2 O 2+4-氨基安替比林+3,5-二氯-2-强苯磺酸®醌亚胺化合物+H 2 O

【器材与试剂】

1.器材 试管、加样器、恒温水浴箱、分光光度计。

2.试剂 (市售试剂盒)

(1)酶混合试剂:尿酸氧化酶>120U/L;POD>1 000 U/L;4-AAP 0.5mmol/L;DHBS 4mmol/L;磷酸盐缓冲液100mmol/L。

(2)300μmol/L尿酸标准液。

【操作】 按表10-5操作。

表10-5　尿酸氧化酶偶联比色法测定血清尿酸的操作步骤

混匀,置室温20min,在520nm处,用空白管调零,读取各管吸光度。

【计算】

【参考区间】 男性:149~416μmol/L;女性:89~357μmol/L。

【质量保证】

1.红细胞内含有多种非特异性还原物质,因此宜用血清或血浆作样本。

2.血清样本室温条件下可稳定3d。

3.血尿酸含量>713.8μmol/L时,用生理盐水稀释后测定,结果乘以稀释倍数。

【应用评价】

1.特异性 尿酸氧化酶催化尿酸的特异性高,过氧化物酶催化反应的特异性较差,维生素C和胆红素对尿酸测定存在负干扰。

2.回收率 94.6%~102.3%。

3.线性范围 178.6~713.8μmol/L。

4.变异系数 在224.8~792.8μmol/L范围内,批内、批间CV<5%。

【临床意义】 尿酸是体内嘌呤代谢的终产物,大部分尿酸经肾随尿液排出体外。

1.肾功能减退时,肾小球滤过减少或肾小管排泄尿酸减少,血清尿酸增高。

2.血清尿酸测定对痛风诊断很有帮助,痛风患者血清尿酸可达800~1500μmol/L。

3.在核酸代谢增加,如白血病、多发性骨髓瘤等,尿酸产生过多,使血清尿酸增高。

4.慢性酒精中毒、妊娠高血压综合征,由于肾排泄尿酸减少,血清尿酸增高。