样本预处理

药物浓度监测中,很少直接对标本进行分析,多数需要对标本进行必要的预处理,以达到浓缩纯化待测组分,减少干扰,提高检测灵敏度和特异性的目的。预处理包括去蛋白、提取和衍生化处理。

(一)去蛋白

TDM常用的血清(浆)、唾液或尿液等都或多或少地含有蛋白质:①大多数药物都不同程度地与蛋白质可逆性结合,因此测定与蛋白质结合部分和自由部分的总血药浓度,不能反映各种原因所致药物蛋白质结合率改变而产生的自由药物浓度变化。特别是与蛋白质结合率高的药物,结合率的轻微改变,都将导致自由药物浓度的明显变化而显著影响药效。所以在TDM中主张直接测定自由血药浓度。②蛋白质对多种测定方法构成干扰,特别是色谱法。另外蛋白质还可造成仪器污染、损害。

去蛋白的方法有离心法沉淀、层析法、超滤法和超速离心法等。离心沉淀法简便快捷,是临床工作中的常用方法。

(二)提取

提取的目的是为了浓缩和纯化待测组分,提高检测的灵敏度,并改善检测方法的特异性,减少干扰。临床常用的提取方法有液-液提取和液-固提取两种。

1.液-液提取 大多数药物都是有机化合物,不少为弱酸、弱碱,它们在p H不同的溶液中,将发生程度不等的解离。因此在特定的p H溶液中,利用药物在两相(有机相和水相)中的分配系数不同而分离,从而达到提取目的。这类方法由于样本和提取介质均为液相,称液-液提取。

2.液-固提取 又称固相柱提取,是近年发展的一种提取方法。可根据待测物的理化性质选用一合适的常压短色谱柱(TDM中常用疏水性填料柱),将去蛋白后的样本通过该柱后,以适当强度的溶剂洗脱,选择性收集含待测组分的洗脱液部分,即可达到较理想的提取目的。此类提取柱已有数种商品化生产,可供选用。本法比液-液提取繁琐,回收率及提取特异性均高。

(三)化学衍生化反应

临床工作中常用光谱法和色谱法检测药物浓度,但多数药物不具有光吸收性质,因此可根据待测物的化学结构和检测方法的要求,通过化学衍生化反应,特异性地引入显色(可见光分光法)、发光(紫外、荧光、磷光)基团,提高检测的灵敏度和特异性。