有关培养基及缓冲液配法

有关培养基及缓冲液配法_病毒生物实验

一、有关培养基及缓冲液配法

1.1640培养基

(1)加1640培养基(RPMI)一包于2000ml三角瓶中，加入950ml双蒸水充分摇匀使1640溶解，加入2.0gNaHCO₃调节pH值至低于工作pH值0.2～0.3 (用1mol/LNaOH或1mol/L HCl定容至1000ml。

(2)将溶解后的1640抽滤除菌，分装于100ml培养瓶(或三角瓶)中，每瓶90ml。

(3)除菌后的1640培养基，加入1ml双抗和10ml小牛血清，塞紧橡皮塞后置4℃保存备用。

2.Hank's液配制

无Ca²⁺、Mg²⁺Hank's液

NaC_l　　　　　　　　　4.5g

KC_l 　　　　　　　　　0.2g

NaHCO₃　　　　　　　0.175g

Na₂HPO₄·1₂H₂O　　　0.076g

KH₂PO₄ 　　　　　　 +0.03g

葡萄糖　　　　　　　　0.5g

0.4%酚红　　　　　　+2.5ml

将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后补加双蒸水至500ml，以5.6%NaHCO₃调整pH值至7.4，4℃冰箱保存备用。

3.0.4%酚红溶液配制

酚红　　　　　　　　　　　0.4g

0.1%NaOH溶液　　　　　　　11.28ml

将酚红置于研钵中，加磨边缓缓加NaOH溶液，直到所有颗粒完全溶解，置于至100ml量杯中，最后加双蒸水至100ml，摇匀后，保存于4℃冰箱内备用。

4.Hank's液(原液)

原液甲:NaCl　　　　　　　　　　　　　　 160g

KCl 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　8g

MgSO₄·7H₂　　　　O2g

MgCl₂·6H₂　　　　O2g

上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。

CaCl₂　　　　　2.8g溶于100ml双蒸水

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

原液乙:Na₂NPO₄·12H₂　　　　　　　O3.04g

　　　　KH₂PO₄ 　　　　　　　　　　　　　　　　1.2g

　　　　葡萄糖 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20g

　　　　加入800ml双蒸水，溶解。

　　　　0.4%酚红溶液100ml

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

使用时原液甲、原液乙按下列比例配成Hank's液使用液:原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份过滤，55.16kPa (8磅/平方吋)20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO₃调整pH值。

5.MEM培养液

MEM培养基一袋，加1000ml双蒸水，过滤除菌或高压灭菌，分装于100ml盐水瓶中，每瓶90ml，用前以7%NaHCO₃调pH值到7.2～7.4，并加10%犊牛血清。

6.双抗配制

青霉素　　　　　　　　　　　　100万IU

链霉素 　　　　　　　　　　　　　　1g

Hank's液 　　　　　　　　　　　100ml

将青霉素、链霉素溶解于100ml Hank's溶液中，此为双抗溶液，无菌操作，分装小瓶，每瓶中1ml内含有青霉素10000IU、链霉素10000μg，低温冻结保存。

使用时每100ml营养液中加双抗1ml，即每1ml营养液中含青霉素100IU、链霉素100μg。

7.0.25%胰蛋白酶配制

胰蛋白　　　　　　　　　　0.25g

Hank's液　　　　　　　　　100ml

将胰蛋白酶溶于Hank's液中，待完全溶解后，用0.2μm滤膜过滤，检验无菌后才能使用。无菌分装小瓶，每瓶5ml，低温冻结保存。使用时以7%NaHCO₃调节pH值到7.6～7.8。