的电泳性质

5．4　SOD的电泳性质

不同来源的Cu，Zn－SOD的净电荷不仅决定其蛋白质分子组成中碱性氨基酸和酸性氨基酸的含量，而且受SOD溶液pH的影响。在一定的pH溶液中，Cu，Zn－SOD的电泳性质与其等电点有关。由表5－11可见，马林鱼Cu，Zn－SOD的等电点为4．3，4．9与5．4，其相对迁移率分别为0．62，0．56与0．50；啮鱼Cu，Zn－SOD的等电点为8．2，8．3，8．5与8．7，其相对迁移率分别为0．36，0．30，0．25与0．21。不过，大多数来源的Cu，Zn－SOD等电点约为4左右，因此在pH为8．4的溶液中电泳Cu，Zn－SOD带负电荷，均泳向正极。

表5－11　Cu，Zn－SOD的相对迁移率与等电点

图5－1　牛红细胞SOD的聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱

A．蛋白染色；B．NBT活性

SOD电泳的方法很多，如圆盘电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）、免疫电泳、等电点聚焦电泳和毛细管电泳等，其中聚丙烯酰胺凝胶电泳用得最多。不同来源的Cu，Zn－SOD在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中显示的酶带数常不相同，如牛红细胞SOD显示1条酶带（如图5－1所示），人红细胞SOD为2条酶带，而小鸡肝SOD为3条酶带，鸭血SOD为6条酶带。

张彩莹等采用PAGE电泳分析了羊血红细胞Cu，Zn－SOD，纯化的Cu，Zn－SOD呈现出1条活性带，见图5－2。Tibell LAE纯化了重组hEC－SOD，粗酶显示有多条带，但纯酶仅有1条带，见图5－3。

图5－2　纯化的Cu，Zn－SOD的SDS－PAGE图谱

—山羊SOD；2—Markers；3—绵羊SOD

图5－3　重组hEC－SOD的SDS－PAGE图谱

1—亲和层析后的hEC－SOD；

2—粗酶液

王尊生等利用DEAE－FF离子交换柱分离纯化了蛹虫草SOD前酶（apo－cm－SOD）。SDS－PAGE电泳分析表明，在峰2、峰3的图谱中（见图5－4，lane3、4、5）也有一个17kD的蛋白条带与峰1相应位置上的蛋白相对分子质量一致（见图5－4，lane2）。活性染色表明，它们都是大肠杆菌内源SOD，酶活性较低，lane6是纯化了的hEC－SOD。P．Dolashra－Angea等在H．lutea103细胞培养过程中，采用Cu^2＋诱导，发现培养出现两种SOD，其中Cu，Zn－SOD的活性比Mn－SOD要高出3倍多，见图5－5。

图5－4　apo－cm－SOD的SDS－PAGE电泳图谱

M—标准相对分子质量蛋白；1—粗酶液；2—DEAE－FF蛋白峰1（流穿液）；3—DEAE－FF蛋白峰2；4、5—DEAE－FF蛋白峰3；6—CM－52纯化后的hEC－SOD

图5－5　在H．lutea103细胞中Cu^2＋诱导SOD的生物合成的PAGE图谱

1—标准Mn－SOD（E．coli）；2—标准牛红细胞Cu，Zn－SOD；3～5—在细胞培养过程中添加20μg/mL、70μg/mL和100μg/mL Cu^2＋后两种SOD的存在情况