生物化学实验的基本操作

一、生物化学实验的基本操作

（一）玻璃仪器的洗涤

玻璃仪器的洗涤是生物化学实验的一个重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应光洁、明亮、不挂水珠，常用的洗涤方法有：

1．一般玻璃仪器，如烧杯、试管等，可用肥皂、合成洗涤剂、去污粉等用毛刷仔细刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用少量蒸馏水冲洗2～3次，置于干燥箱中烘干备用。

2．容量分析仪器，如移液管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗，可在用毕后，即用自来水冲洗，直至不挂水珠，再用少量蒸馏水冲洗2～3次即可备用。若冲洗后的仪器仍挂水珠，则应将其沥干后，用重铬酸钾洗液浸泡4～6h，然后用自来水冲洗干净，再用少量蒸馏水冲洗2～3次。

3．黏附有血浆的刻度吸量管，可先用45％尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗干净。若仍未清洁，可在重铬酸钾洗液中浸泡4～6h后，用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次；或者用1％氨水浸泡，使血浆溶解，然后依次用1％盐酸溶液、自来水、蒸馏水冲洗。

4．新购置的玻璃仪器有游离碱存在，须在1％～2％盐酸中浸泡2～6h，以除去游离碱后，用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗2～3次。

5．使用重铬酸钾洗液时应注意的事项：

（1）需用重铬酸钾洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干，再用洗液浸泡。否则，洗液因稀释而降低其氧化力，甚至失效。

（2）由于Hg^2＋、Ba^2＋、Pb^2＋等离子易与重铬酸钾洗液反应生成沉淀而黏附在容器壁上，因此凡接触过这些离子的容器，可先用1％硝酸或5％～10％EDTA润洗除去这些离子，再用水冲洗、沥干后，最后用洗液浸泡。

（3）有机化合物、油类、有机溶剂均可使洗液还原失效，因此容器壁上若粘附有大量油类、有机物等，应先去除，然后再用洗液浸泡。

（4）由于洗液有很强的酸性和氧化性，所以使用时应注意不能溅溢在皮肤或衣物上，以免被烧伤或烧坏。

（5）当洗液颜色由深棕色变为绿色时，是由于重铬酸还原为硫酸铬的原因，所以不能再继续使用。

（二）移液管的使用

移液管是用来移取定量体积溶液的量器。生物化学实验中常用的移液管有三种，如图1-1所示。

图1-1　各种移液管

1．刻度移液管：分为刻度刻至尖端和不刻至尖端两种。若使用刻度刻至尖端的移液管时，在将液体放出后，应吹出最后留在管内的少量液体。

2．奥氏移液管：准确度最高，使用时必须吹出留在尖端的液体。

3．大肚移液管：一般只在上端有刻度线，将所量取的液体放出后，只需将吸量管的尖端触及器壁约0.5min即可，不得吹出尖端的液体。应当注意的是，有的移液管在下端狭窄处还有一刻度线，则两刻度线之间的体积才代表该移液管上所注明的体积。

近年来，使用较多的还有微量移液器（MicroPipette）。它具有使用方便、取加样快速、计量准确、不易破损等优点，其取样尖端由一次性使用的塑料制成，只需更换吸嘴，即可移取不同样品。

定量移液器是由钮、杆、压盘、外壳、柱塞、弹簧、吸引管、吸嘴等部分构成，如图1-2所示，可分为两种类型：

图1-2　定量移液器的结构

（1）固定式：只能取加一定容量，不能调节。其规格有10μL、20μL、25μL、30μL、50μL、100μL、200μL、250μL、300μL、400μL、500μL、1000μL等。

（2）可调式：在其容量量程范围内，可根据需要调节取样和加样的量。例如0～200μL，10μL～100μL，100μL～1000μL，500μL～2500μL。

使用方法：吸液前先把吸嘴套在吸引管上，并轻轻旋紧，以保证接合严密。用大拇指按下按钮到第一停止点，以排出一定容积的空气，此时即可吸液。吸液时把吸嘴尖浸入取样液内几毫米处，徐徐松开大拇指，让按钮慢慢自行复原，即完成取样。

排液，将吸液器的吸嘴尖置于加样容器壁上，用拇指慢慢地将按钮按下到第一停止点，停留1s，黏性较高的溶液停留5～10s，然后把按钮按到第二停止点，再让吸嘴沿着容器壁向上滑动。当吸嘴尖与容器壁或与溶液不接触时，释放按钮，使其返回到初始位置。

（三）溶液的混匀

某一反应的充分进行，必须使反应的体系内各种物质分子充分接触。因此，每加入一种试剂后，均须充分混匀。当溶液稀释时，亦需充分混匀，才能获得浓度均一的溶液。溶液混匀的方法通常有以下几种：

1．使盛器作离心运动。

2．左手持试管上端，以右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。

3．利用漩涡混合器混匀，如图1-3所示。

4.不得已时，可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。无论用何种方法混匀，均需防止盛器内液体溅出或被污染（Contamination），严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。

图1-3　旋涡混合器混匀

（四）溶液的过滤

过滤有普通过滤、减压过滤及保温过滤等。在此仅介绍普通过滤。

过滤前的准备：取一张圆形的滤纸，对折两次，打开成一圆锥体（一边为三层，一边为一层），把它放入干燥的漏斗中。漏斗的边缘要比滤纸边缘高出大约0.5～lcm。漏斗壁与滤纸应完全密合。可用欲过滤的液体润湿滤纸，并用玻璃棒小心地按压滤纸，使滤纸各处紧密地贴在漏斗壁上，尤其应注意把滤纸的三层部分按平，不要让其留有小气泡，否则过滤时易于冲开。

过滤时放正漏斗，其边缘应处于水平面上。漏斗下部的尖端应与接收溶液的容器内壁接触，以避免溶液流下时跳溅。向漏斗内倾注液体时，用左手拿着玻棒，并让玻棒与滤纸近于垂直，液体沿玻棒往下引流。液体最多允许加至距滤纸边缘5mm处，液体加得过多，沉淀物则会随溶液上浮而粘附于漏斗壁并混入滤液中。向漏斗内加完液体后，要把盛有待滤液体的容器沿着玻棒向上滑动一下，以免待滤液体流到容器外面。

（五）离心机的使用

离心法也是分离沉淀物的一种方法。它是利用离心机转动的离心力，使比重较重的沉淀物沉积在离心管底部，以达到分离的目的。其上层的液体称为上清液。

电动离心机的使用方法：

1．将待离心的液体置于离心管或小试管中，并检查离心管（或小试管）的大小与离心机的套管是否相匹配。

2．取出离心机中的全部套管，并检查底部是否铺好软垫，套管底部有无碎玻片或漏孔（有碎玻片必须取出，漏孔应用蜡封住）。检查合格后，将盛有离心液的两离心管分别放入套管中，然后连套管一起分置于粗天平两侧，通过往离心管与套管之间滴加水来调节两边重量使之达到平衡。

3．将已平衡的两只装有离心管的套管分别放入离心机相互对应的两插孔内；盖上离心机盖；打开电源开关；逐步扭动转速旋钮，先缓慢增加离心机转速，然后调到所需的转速；达到离心所需的时间后，将转速旋钮逐步回零，关了电源，让离心机自然停止转动后（注意不可强迫停转）取出离心管。