植物组织培养过程

植物组S织培养过程

植物组织培养过程为：预备阶段→诱导去分化阶段→继代增殖阶段→生根成芽阶段→移栽成活阶段。

预备阶段。选择合适的外植体是本阶段的首要问题，外植体是指能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段，如一个芽、一节茎。

选择外植体应综合考虑几个因素：①大小要适宜，不宜过小，外植体的组织块要达到2万个细胞以上才容易成活；②同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别；③植物胚与幼龄组织器官比会化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织。愈伤组织原意指植物因受创伤而在伤口附近产生的薄壁组织，现已泛指经细胞与组织培养产生的可传代的未分化细胞团；④不同物种相同部位的外植体其细胞分化能力可能大不一样。总之，外植体的这样，一般以幼嫩的组织或器官为宜。此外，外植体的人分化及内分化的最适条件都需经摸索，他人成功的经验只可借鉴，无捷径可循。

除上述原因要求选择外观健康的外植体外，尽可能除去外植体内的各种微生物，也是成功进行植物组织培养的前提。采用消毒剂处理时间的长短，与外植物对所用试剂的敏感程度密切相关。对外植体除菌的一般程序是：外植体→自来水多次漂洗→消毒剂处理→无菌水反复冲洗→无菌滤纸吸干。

接下来是配制适宜的培养基。组织培养基可分为：①含量丰富的基本成分如蔗糖或葡萄糖高达每升30克，以及氮、磷、钾、镁等；②微量的无机物，如：铁、锰、硼酸等；③微量有机物，如激动素、吲哚乙酸、肌醇等。

诱导去分化阶。外植体是已分化成各种器官的切段，组织培养的第一步就是让这些器官切段去分化，使各细胞重新处于旺盛有丝分裂的分生态，因此培养基中一般应添加较高浓度的生长素类激素。

继代增殖阶段。愈伤组织长出后，经过4～6周的细胞迅速分裂，原有培养基中的水分及营养成分多已耗失，细胞的有害代谢物已在培养基中积累，因此必须进行移植，即继代增殖。同时，通过移植，愈伤组织的细胞数大大扩增，有利于下阶段收获更多的胚状体或小苗。

生根成芽阶段。愈伤组织只有经过重新分化才能形成胚状体（指在组织培养中分化产生的具有芽端和根端类似合子胚的构造），继而长成小植株。通常要将愈伤组织移置于含适量细胞分裂素和生长素的分化培养基中，才能诱导胚状体的生成，光照是本阶段的必备外因。

移栽成活阶段。生长于人工照明玻璃瓶中的小苗，要适时移栽室外以利生，此时的小苗还十分幼嫩，移植应在能保证适度的光、温、湿条件下进行。在人工气候中锻炼一段时间，能提高幼苗的成活率。