糖原的测定

实验十一　糖原的测定

【实验目的】

掌握糖原的测定原理及方法。

【实验原理】

正常肝糖原的含量约占肝重的5%。许多因素可影响肝糖原的含量，如饱食、饥饿、糖皮质激素及肾上腺素等。

糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使后者进一步脱水生成糖醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛。此化合物再和蒽酮作用生成蓝色化合物，与用同法处理的标准葡萄糖溶液比色，即可推算出糖原含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前肝组织先放在浓碱中加热，破坏其他成分，而保留肝糖原。

【药品试剂】

1．生理盐水:0．9%NaCl溶液。2．30%KOH。

3．0．05 mg/ml葡萄糖标准液。

4．0．05%蒽酮试剂:取重结晶蒽酮0．05 g及硫脲1 g，溶于66%硫酸100 ml中，加热溶解，置棕色瓶中，放冰箱中可保存两周。

5．蒽酮的重结晶方法:蒽酮6 g溶于300 ml无水乙醇中，加热至完全溶解，加蒸馏水至不再析出结晶，放入冰箱过夜，抽滤得淡黄色结晶，置棕色瓶内，放入干燥器备用。

【实验器材】

100 ml容量瓶、721分光光度计、水浴箱、试管若干。

【实验方法】

1．肝糖原的提取:取体重在25 g以上的健康小白鼠1只，断头处死，剖腹取出肝脏，用生理盐水冲洗后，再用滤纸吸干水分，准确称取肝组织0．5 g，放入盛有30%KOH溶液1．5 ml的试管中，置沸水浴煮20分钟(肝组织必须全部溶解，否则影响比色)，取出后冷却，将试管内容物全部移入100 ml的容量瓶(用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶内)，加蒸馏水至刻度，仔细混匀。

2．糖原的测定:取干净试管3支，编号后按表1-6加样，混匀后，置于沸水浴中10分钟，冷却后选用620 nm的单色光，用空白管调零，测定2．3管的吸光度。

表1-6　　　　　　　　肝糖原的测定

3．计算:

肝糖原(g/100g_肝组织)

【注意事项】

1．此法测定值宜在肝糖原含量为1．5～9%之间。若肝糖原小于1%时，由于蛋白质的干扰测定结果不准确，须改用间接法测定，即在肝组织消化后用95%乙醇沉淀肝糖原(1∶1．25)，离心分离，用蒸馏水2 ml溶解肝糖原，再按表1-6操作。

2．公式中的1．11为此法测得葡萄糖含量换算成糖原含量的常数，即100μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于111μg糖原用蒽酮试剂所显之色。

【思考题】

肝糖原的制备和测定原理是什么?