乙酰-肟法测定血清尿素氮

实验十二　乙酰-肟法测定血清尿素氮

【实验目的】

1．掌握血清尿素氮的测定原理和方法;

2．了解尿素氮测定的临床意义及正常值。

【实验原理】

血液中含有许多物质代谢过程中产生的非蛋白含氮化合物，例如尿素、尿酸、肌酸、肌酐、胆红素及氨等。其中尿素含量约占l/3～1/2。尿素是体内蛋白质、氨基酸分解代谢的终产物。体内蛋白质和氨基酸分解代谢产生氨和CO₂，氨代谢的主要途径是在肝脏合成尿素后释放进入血液，然后经血液循环至肾脏排出体外。血液中尿素由肾小球滤过，30%～40%经肾小管重吸收，肾小管可排泌少量尿素。正常生理活动时，尿素的生成和排泄处于平衡状态，使血尿素浓度保持相对稳定。正常人血尿素安静值为3．2～7．0 mmol/L。

血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰-肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其反应式如下:

其产生的颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色，即可求得血清中尿素的含量。由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干扰物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定，加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。

【药品试剂】

1．尿素氮试剂:蒸馏水100 ml，浓硫酸44 ml，85%磷酸66 ml，冷却至室温后，加氨基硫脲50 mg，硫酸镉(3CdSO₄·8H₂O)2 g，溶解后稀释至1000 ml。

2．20 g/L二乙酰-肟试剂:称取二乙酰-肟20 g，加入蒸馏水约900 ml，溶解后稀释至1000 ml。

3．357 mmol/L尿素氮标准储存液:称取尿素1．072 g，溶解于蒸馏水中，定容至1000 ml。

4．17．85mmol/L尿素氮标准应用液:取储存液5 ml，加蒸馏水至100 ml。

【实验器材】

721分光光度计、离心机、三用水箱、采血针、吸血管及胶头、棉签、离心管、普通试管、具塞试管、移液管。

【实验方法】

1．取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按表5-14操作:

表5-14　　　　　　　血清中尿素的测定

2．混匀后置沸水浴中煮沸12分钟，取出在冷水中冷却5分钟，分光光度计波长540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。

3．结果计算

【思考题】

1．什么是非蛋白含氮，血清中的非蛋白含氮化合物包括哪些物质?

2．血清中尿素的检查有何意义?