侵袭性淋巴瘤的转移指标

二、肿瘤转移抑制基因

1．nm23－H1　1988年Steeg等从鼠黑色素瘤细胞株cDNA库中，用差异杂交技术筛选到24个差异表达的克隆，再以这24个cDNA作探针分别与7株具有不同转移能力鼠K－1735黑色素瘤细胞互补的RNA杂交，只有其中的第23个克隆的cDNA可能具有抑制肿瘤的转移能力，由此被命名为nonmatastasis23（nm23）。

nm23基因有nm23－H1和nm23－H2两个亚型，定位于17q21．3－22，2个亚型基因分别编码NDPK－A和NDPK－B（nucleoside diphosphate kinase A and B）。Steeg首先在具有高转移能力的黑色素瘤细胞中发现nm23－H1的表达显著减少，从而确定nm23－H1在肿瘤转移中的作用。随后在多种人类肿瘤中，如人黑色素细胞瘤、乳腺癌细胞、胃癌、肝癌、前列腺癌等都发现nm23－H1基因的表达水平与肿瘤细胞的转移潜能呈负相关，表明nm23－H1具有肿瘤转移阻遏作用。

举几个例子加以说明。

（1）Kodera Y等用Northern blot技术，分析比较癌患者的癌组织、癌旁黏膜侵袭部位组织和正常胃黏膜的nm23－H1的表达，发现虽然胃癌组织与正常胃黏膜的nm23－H1的表达没有显著差别，但是癌旁侵袭部位和转移的组织均有nm23－H1表达的显著降低。

（2）Nakayama T等用免疫组化技术分析了转移和没有转移的原发性肝癌、癌旁组织、转移灶的nm23－H1的表达水平。发现其表达量：癌旁组织＞原发灶＞转移灶。

（3）Hartsough MT等用nm23－H1cDNA转染高转移能力的乳腺癌细胞、黑色素细胞、前列腺癌细胞、鳞状细胞癌后接种到动物体内，发现这些细胞的转移能力显著减少。在培养细胞中，转染nm23－H1cDNA后其细胞移动、侵袭性和集落形成都受到抑制，但致瘤性和增殖不受影响。

nm23－H1抑制肿瘤转移作用的机制：nm23－H1基因抑制转移的作用可能通过影响肿瘤细胞运动，因为细胞运动是转移的前提。Kantor JD等用nm23－H1cDNA转染小鼠黑色素瘤细胞和人乳腺癌细胞后，发现这两种细胞对血清和血小板生长因子及类胰岛素生长因子刺激引起的细胞运动，提示，nm23－H1基因产物可能与刺激细胞运动必须的某些细胞内分子之间发生相互作用。

nm23－H1基因产物可能通过调节黏附分子抑制侵袭转移，黏附分子在细胞移动中起重要作用。Parhar RS等用nm23－H1cDNA转染小鼠黑色素瘤细胞（B16F10），nm23－H1基因的过表达显著降低其侵袭转移能力和明显提高生存率，同时发现黏附分子ICAM－1的显著减少，对LAK细胞中介的腺病毒作用敏感性提高。

Leone A、Hailat N和Takeda O等发现14％～30％的晚期神经母细胞瘤患者有nm23－H1基因的扩增和过表达，与预后不良相关。这些报道的结果与nm23－H1作为肿瘤转移抑制基因的作用是不相一致的，而提示nm23－H1反而具有促进肿瘤转移的作用。Malin AE等用低转移能力的神经母细胞瘤细胞系NB69作为模型，用nm23－H1基因转染NB69细胞，获得稳定转染株，接种小鼠获得动物模型，证明nm23－H1基因过表达，增加肺转移发生率和转移灶，但对原发灶的发展没有影响，首次证明nm23－H1基因在神经母细胞瘤中有促进肿瘤转移的作用。这种在肿瘤转移中具有双重作用的基因，nm23－H1不是第一个，CD44在神经母细胞瘤和乳腺癌的转移中就起相反的作用。Malin对此的解释是，胚胎肿瘤（如神经母细胞瘤）和非胚胎肿瘤（如乳腺癌）存在不同的遗传背景，因此可能使nm23－H1在转移中起不同的作用。

2．KAI1基因　由于KAI1能抑制前列腺癌实验模型中癌细胞的肺转移灶的形成而被认为是肿瘤转移抑制基因，至今已有许多文献报道KAI1在多种恶性侵袭性肿瘤（黑色素瘤、结肠癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等）中的表达显著下调，普遍认为它在肿瘤侵袭转移中起重要作用。下面介绍几个实验室的研究结果。

Ow K等用原位杂交和免疫组化技术检测了135分石蜡包埋的膀胱癌组织切片中的KAI1mRNA和蛋白质表达水平，他们发现正常与肿瘤组织之间、非侵袭性与侵袭性肿瘤之间比较，后者的KAI1mRNA和蛋白质表达水平都显著降低，提示KAI1表达的下降与膀胱癌侵袭性相关。

Geradts J等也是用免疫组化技术分析检测了47例侵袭性鳞状细胞癌石蜡包埋的组织，发现其中37例（占79％）显示KAI1的表达显著下调。

Yang X等在已发现高转移性乳腺癌细胞中KAI1mRNA显著高于非转移性乳腺癌细胞的基础上，再用免疫组化和Western blot技术分析了KAI1蛋白质表达水平，发现KAI1的mRNA表达水平与其蛋白表达水平平行，且与乳腺癌细胞的转移能力呈反比关系，即在正常乳腺组织和非侵袭性乳腺癌组织KAI1高表达，在大多数侵袭性乳腺癌组织中KAI1低表达，越恶性的乳腺癌，KAI1表达越低。

Jackson P等在他们先前发现侵袭性膀胱癌中KAI1表达显著减少的基础上，进一步研究KAI1在膀胱癌中的作用，分析KAI1mRNA水平与膀胱癌的细胞行为之间的关系，发现低KAI1 mRNA水平与增加膀胱癌细胞侵袭能力相关，减少了Ca^2＋依赖和非依赖的细胞与细胞的黏附和减少细胞黏附到纤连蛋白（fibronectin）的能力，提示KAI1在肿瘤侵袭转移中起重要作用。