亲和层析法检测尿液

实验项目二　亲和层析法检测尿液HCG

学习目标

【知识目标】

（1）能用自己的语言描述亲和层析法检测尿液HCG的原理。

（2）能够迅速而准确地陈述亲和层析法检测尿液HCG实验操作的要点。

（3）能够准确鉴别尿液HCG检测结果，并能说明其临床意义。

【能力目标】

（1）能够正确完成金标试纸检测尿液HCG的各项操作内容，做到步骤正确、动作连贯协调、内容全面无遗漏。

（2）能够正确指导受试者采集尿液，并说明注意事项。

（3）能够正确分析除妊娠外哪些疾病还可能导致尿液HCG检测结果呈阳性。

案例引导

患者，女，28岁，婚龄2年。最近一个月食欲差、偶有恶心，早晨起床后呕吐，有时头痛，嗜睡，体温37℃。结合个人情况，采用早早孕HCG试纸检测尿样，结果显示两条紫红色条带。请据此判断检测结果，并给出临床诊断。

（提示：妊娠实验结果呈阳性）

【实验原理】

人绒毛膜促性腺激素（HCG）是一种糖蛋白，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素）具有同源性的α链和一条高度特异的β链。它由胎盘的滋养层细胞分泌。

本实验采用两点夹心固相亲和层析法定性检测尿液中的HCG。在层析试纸条的检测区预包被有针对HCG的α链（α亚基）制备的抗HCG抗体，质控区预包被有抗鼠IgG抗体，同时在试纸条下端还吸附有经胶体金（紫红色）标记针对HCGβ链（β亚基）制备的抗HCG抗体。

检测时，当待测尿液中含有一定量的HCG时，HCG通过层析作用到达金标位置，HCG的β链与试纸条上预包被的胶体金标记抗β－HCG抗体发生免疫反应，结合成抗原－抗体复合物，继续向上迁移到达检测区，HCG的α链与预包被的抗α－HCG抗体发生免疫反应，形成夹心式复合物，这样就把金标通过HCG桥连到检测线上。达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，呈现为一条紫红色条带。

多余的金标继续泳动到控制线位置，由于和鼠源性抗β－HCG单抗发生免疫反应，从而桥连金标显色，又出现一条紫红色条带，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含HCG时，金标和检测区抗体不发生桥连，仅质控区显色，出现一条紫红色条带，这样就得到了阴性结果。当检测线和质控线均不显色时，表示试剂盒无效（图3－5）。

图3－5　亲和层析法定性检测尿液中HCG的原理示意图

【实验器材】

一次性洁净尿杯，HCG胶体金法检测试纸条。

【药品及试剂】

新鲜尿样，其余试剂随试纸条配备。

【试剂配制】

采用一次性洁净尿杯收集任何时间的新鲜尿样（第一次晨尿最佳）。若不能及时送检，尿样标本在2～8℃冷藏可保存48h。长期保存需冷冻于－20℃的条件下，检测前应将试剂和尿样标本恢复至室温（20～30℃）。

操作流程

【操作步骤】

检测前须将尿液或血清、血浆标本及试纸条恢复至室温（20～30℃）。

（1）撕开铝箔袋，取出试纸，在1h内应尽快使用。

（2）使用时将试纸标有指示箭头的一端浸入尿液中，液面不得超过试纸条箭头下端的终止线。

（3）保持10s后取出平放；或直接将尿液2～3滴加到指示箭头端。

（4）等待色条带的出现，2～5min时直接观察结果，5min后判定结果为无效。

【实验数据处理及结果分析】

（1）阳性（＋）：出现两条紫红色条带，一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）内。

（2）阴性（－）：仅在质控区内出现一条紫红色条带，在检测区内无红色条带出现。

（3）无效：5min后在质控区无紫红色条带出现，提示操作不当，如样本量不够、层析过程不正常或试纸条已过有效期或试纸条已经损坏等。

【注意事项】

（1）本品为一次性使用，原包装应存储于室温为4～30℃的条件下。

（2）试纸超过有效期后请勿使用。

（3）打开铝箔袋后，请勿将试纸条置于空气中过久，以免受潮。

（4）当HCG浓度很高时，检测线颜色可能变浅，属于正常现象。

（5）若受试者怀疑有受孕可能，而尿液检测结果呈阴性，可在48～72h后重新收集晨尿再次测定。

（6）由于检测的标本尿液具有潜在危险性，故应作为传染性试剂处理。

【实验意义】

1.意义

（1）早期妊娠诊断：通常受精后7～10d，血清或尿液中就能检测到HCG，以后HCG的浓度快速上升；到孕后10～12周达到最高峰。由于HCG在受精后很快出现，并且随后浓度快速升高，因此，HCG可以作为怀孕早期诊断的很好的标记物。

（2）流产诊断和监测。

①先兆流产：若尿液中HCG浓度仍维持在高水平，一般不会发生流产。在保胎治疗过程中，如HCG浓度不断增高，则说明保胎有效。如果HCG浓度持续降低，说明保胎无效，不必再继续进行保胎治疗，应尽早处理，以免死胎滞留过久而发生宫内感染。

②不完全流产：不完全流产时，宫腔内尚有残留的胎盘组织，HCG检查结果仍可呈阳性；完全流产或出现死胎时HCG检查结果由阳性转为阴性，因此，检查HCG可作为保胎治疗和判断流产的参考依据。

（3）异位妊娠的诊断。

（4）妊娠滋养细胞疾病的诊断与病情观察。

2.其他

子宫内膜增生、子宫肿瘤、葡萄胎、睾丸间质细胞癌、肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌等患者血液和尿液中HCG浓度也明显增高，这可作为这些肿瘤的早期诊断指标。当HCG作为肿瘤标志物应用时，必须结合临床表现和其他检查结果综合分析才能有意义，也可用于对绒毛膜上皮细胞癌、葡萄胎手术后化疗效果的观察标志，是有效随访监测的手段。

能力检测

一、单项选择题

1.下列关于HCG描述错误的是（　　）。

A.是一种性腺激素　　　　　　B.是一种糖蛋白

C.含有一条α链和一条β链　　D.在人体受精后由胎盘的滋养层细胞分泌

E.含有两条β链

2.下列哪项可能不会导致HCG浓度增高？（　　）

A.子宫肿瘤　　B.葡萄胎　　　C.肝硬化

D.卵巢癌　　　E.子宫内膜增生

3.本实验检测HCG所采用的方法属于下列哪种？（　　）

A.醋酸纤维素薄膜电泳　B.分配层析　　C.离子交换层析

D.凝胶层析　　　　　　E.亲和层析

4.本实验中，下列哪种情况可以判定结果为阳性？（　　）

A.出现两条色带　　B.出现一条色带　　C.没有色带出现

D.出现三条色带　　E.出现四条色带

5.在检测区呈现的紫红色条带含下列哪种复合物？（　　）

A.抗β－HCG抗体

B.抗α－HCG抗体

C.（抗α－HCG）－HCG－（抗β－HCG）

D.抗β－HCG抗体与鼠源性抗体的复合物

E.抗α－HCG抗体和抗β－HCG抗体的复合物