血清甘油三酯浓度测定

实验项目七　血清甘油三酯浓度测定

学习目标

【知识目标】

（1）能够迅速而准确地描述血清甘油三酯浓度测定的操作要点。

（2）能用自己的语言描述磷酸甘油氧化酶法检测血清甘油三酯浓度的原理。

【能力目标】

（1）能够鉴别血清甘油三酯浓度的异常，并能说明其临床意义。

（2）能掌握样本采集过程中的注意事项。

（3）能够准确确定正常空腹血清甘油三酯浓度。

案例引导

患者，女，50岁，因近一段时间慢性腹痛前来就医，血样呈粉红色，血清呈乳状。实验室检查：血清尿素3.1mmol/L，葡萄糖5.2mmol/L，甘油三酯浓度大于50mmol/L。请指出该患者所患为何种病。

（提示：高甘油三酯血症）

【实验原理】

甘油三酯（TG）又称为中性脂肪，其甘油骨架上结合有3分子脂肪酸。甘油三酯的主要生理功能是储能和供能，主要分布在皮下、腹腔大网膜、肠系膜、内脏周围等脂肪组织中。甘油三酯占血脂总量的90%～95%，内源性甘油三酯主要以VLDL的形式运输，外源性甘油三酯主要以CM的形式运输。血脂的含量受膳食、种族、性别、年龄、职业、运动状况、生理状态以及激素水平等多种因素影响，波动范围较大。例如：青年人血浆胆固醇水平低于老年人；患有某些疾病时，血脂含量有很大变化，如糖尿病和动脉粥样硬化的患者，血脂浓度一般都明显升高。因此，测定血脂的含量在临床上具有重要的意义。

血清甘油三酯的主要测定方法有化学比色法和酶分析法两大类。目前，酶分析法测定为推荐方法。本实验采用磷酸甘油氧化酶法（GPO－PAP法）。

血清中甘油三酯经脂蛋白酶（lipoprotein lipase，LPL）作用，可以水解为甘油和游离脂肪酸（free fatty acid，FFA），甘油在ATP和甘油激酶（glycerokinase，GK）的作用下，生成3－磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶（glycerophosphate oxidase，GPO）作用氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，H₂O₂与4－氨基安替吡啉（4－AAP）及4－氯酚在过氧化物酶（peroxidase，POD）作用下，生成红色醌类化合物，其颜色深浅与甘油三酯含量（浓度）呈正比，在500nm处有最大吸收峰。因此，将血清样本与同样处理的标准液进行比色，即可求出甘油三酯的含量。

反应式如下：

【实验器材】

试管及试管架，恒温水浴箱，微量加样器，可见光分光光度计（或半自动生化分析仪），比色杯，记号笔。

【药品及试剂】

（1）新鲜血清。

（2）商品试剂盒供应，其主要成分与实验浓度如表3－11所示。

表3－11　磷酸甘油氧化酶法检测血清甘油三酯浓度某试剂盒的主要成分与实验浓度

【试剂配制】

现在多用现成的试剂盒，方便、实用，既适用于手工操作，也适用于自动分析仪。

操作流程

【操作步骤】

1.配制工作液

取10mL R₁加入1瓶R₂中，溶解后即为工作液。工作液应预先保存在已测试过温度（37℃）的恒温水浴箱中。

2.显色反应

取干净试管3支，编号，按表3－12进行磷酸甘油氧化酶法检测血清甘油三酯浓度的操作步骤。

表3－12　磷酸甘油氧化酶法检测血清甘油三酯浓度操作步骤（单位：mL）

3.比色测定

分别混匀，置于37℃恒温水浴箱中，保温10min，分光光度计波长为500nm，比色杯光径为1.0cm（或利用半自动生化分析仪，终点法，用与表3－12同样参数检测），以空白管调零，分别读取标准管和样品管的吸光度或浓度。

【实验数据处理及结果分析】

如读取吸光度值A，则

【注意事项】

（1）本实验受试者需空腹12～14h。

（2）血清在2～8℃下可保存3d，－20℃下可稳定数周。

（3）实验器具必须清洁无污染，以避免试剂空白升高。

（4）操作时避免日光直射。

（5）当样本中甘油三酯含量超出线性范围时，请用生理盐水稀释后重新测定，测定结果再乘以稀释倍数即为实际值。

（6）维生素C（≥0.3mmol/L）、血红蛋白（≥3g/L）、胆红素（≥0.25mmol/L）均可干扰测试。脂血影响作用较小。

（7）显色后吸光度值随时间延长会有一定量升高，故加样后要立即比色。当标本过多时，可置于冰箱中逐管进行比色。

【实验意义】

1.正常值

正常空腹血清甘油三酯浓度一般小于1.71mmol/L（或参考试剂盒提供的参考范围）。临界值为1.71～2.26mmol/L；当患有高甘油三酯血症时血清甘油三酯浓度大于2.26mmol/L。

2.意义

甘油三酯是甘油中的三个羟基与三个长链脂肪酸反应生成的酯类。甘油三脂一部分从肝脏生成，另一部分从食物中得来。检测甘油三酯可用于对患有糖尿病、肾病、脂代谢紊乱以及多种内源性疾病的诊断及监测治疗。

（1）一般认为，高甘油三酯不是冠心病的独立危险因素，只有伴有高总胆固醇、高LDL－C和低HDL－C等因素才有临床意义。高甘油三酯有原发性和继发性两种，原发者多由遗传因素引起，继发者常见于脂肪肝、其他肝病、糖尿病、肾病综合征、胰腺炎、糖原积累病、痛风、冠状动脉粥样硬化、甲状腺功能低下、服用激素避孕药、酗酒、先天性脂蛋白脂肪酶缺陷时甘油三酯异常增高。

（2）血清甘油三酯浓度降低常见于肝功能严重受损、甲状腺功能亢进、垂体功能减退症、肠道相关吸收不良综合征、晚期恶性肿瘤、慢性心功能不全终末期、先天性β－脂蛋白缺乏症等。

能力检测

一、单项选择题

1.成人空腹甘油三酯浓度正常参考值（磷酸甘油氧化酶法）是（　　）。

A.0.22～1.2mmol/L　B.0.56～1.71mmol/L　C.0.12～1.9mmol/L

D.1.0～2.2mmol/L　　E.2.8～3.6mmol/L

2.下列哪项与血清甘油三酯浓度增高无关？（　　）

A.冠心病　　　B.阻塞性黄疸　　C.甲状腺功能低下

D.肾病综合征　E.糖尿病

3.高甘油三酯血症的血清甘油三酯浓度大于（磷酸甘油氧化酶法）（　　）。

A.1.2mmol/L　B.1.71mmol/L　C.1.6mmol/L

D.2.0mmol/L　E.2.26mmol/L

4.下列哪种疾病不可能导致血清甘油三酯浓度降低？（　　）

A.肝功能严重受损　　B.甲状腺功能亢进

C.垂体功能减退症　　D.肠道相关吸收不良综合征

E.甲状腺功能低下

5.下列哪种脂蛋白将肝内合成的甘油三酯向肝外转运？（　　）

A.HDL　B.VLDL　C.LDL　D.CM　E.α－LP