血清总胆固醇测定（酶法）

实验五　血清总胆固醇测定（酶法）

【教学目标】

（1）了解酶法测定血清胆固醇的原理。

（2）掌握酶法测定血清胆固醇的操作技术及临床意义。

【实验原理】

血清总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清中的胆固醇酯可被胆固醇酯酶（CEH）水解成游离胆固醇和游离脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶COD的氧化作用下，生成胆烷－4－烯－3－酮及过氧化氢，过氧化氢在4－氨基安替比林（AAP）和酚存在时，经过氧化物酶（POD）催化，生成红色醌亚胺（Trinder反应），颜色的深浅与标本中胆固醇含量呈正比。

【试剂】

（1）胆固醇液体酶试剂组成如下。

Good’s缓冲液（pH 6．7）　　　　　　　50mmol/L

胆固醇酯酶　　　　　　　　　　　　　　≥200U/L

胆固醇氧化酶　　　　　　　　　　　　　≥100U/L

过氧化物酶　　　　　　　　　　　　　　≥3000U/L

4－氨基安替比林　　　　　　　　　　　　0．3mmol/L

苯酚　　　　　　　　　　　　　　　　　5mmol/L

（2）胆固醇标准溶液（5．17mmol/L（200mg/dL））：精确称取胆固醇200mg，用异丙醇配制成100mL溶液，分装后，于4℃时保存，临用取出，也可用定值的参考血清作标准。

【器材】

半自动生化分析仪或721型分光光度计；试管、吸管、试管架、水浴箱、加样器。

【操作】

取洁净干燥试管三支，按实验表5－1操作。

实验表5－1　血清总胆固醇测定（酶法）操作步骤

混匀，置于37℃水浴箱中保温15min，用721型分光光度计读取，在波长510nm处，以空白管调零，测定各管吸光度，按参考血清为标准计算结果。

【计算】

【参考范围】

正常时，血清总胆固醇含量不大于5．2mmol/L；边缘升高时，血清总胆固醇含量为5．2～6．2mmol/L；患高胆固醇血症时，血清总胆固醇含量不小于6．2mmol/L。

【临床意义】

（1）血清总胆固醇含量增高：常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症（如家族性高胆固醇血症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等）、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和银屑病。

（2）血清总胆固醇含量降低：常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，以及癌症晚期等。

【注意事项】

（1）试剂中酶的质量影响测定结果。

（2）比色后尽快清洗试管和比色杯，防止染料沉积污染影响以后的测定。

（3）检测标本可为血清或者血浆（以肝素或EDTAK₂抗凝）。

【思考题】

（1）维生素C、谷胱甘肽等还原性物质对本实验会引起正偏差还是负偏差？

（2）若胆固醇酯水解不完全，会造成测定结果偏低还是偏高？

（王易振）