药品无菌检查

实训41　药品无菌检查

一、实训目的

（1）掌握用直接接种法进行注射液或供注射用原料药的无菌检查的方法和程序。

（2）掌握无菌检查法结果的判断及检验报告的书写。

二、实训原理

无菌检查法是用于确定要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。直接接种法适用于非抗菌作用的供试品；薄膜过滤法适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。本实训采用直接接种法。

无菌检查应在环境洁净度10000级下和局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》（GB／T　16292～16294—2010）的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

三、实训器材

1．设备

无菌室，超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，生化培养箱，电炉，冰箱。

2．仪器与用具

烧杯，量筒，试管，吸管（1mL、2mL），漏斗，接种环，记号笔，小砂轮，酒精灯，玻璃棒，天平。

3．培养基与试剂

硫乙醇酸盐流体培养基，改良马丁氏培养基，NaCl，碘酒。

4．检验样品

注射用水。

四、实训步骤

（一）实训准备

1．硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）250mL

依照硫乙醇酸盐流体培养基试剂瓶上说明方法配制。配制250mL，分装于12支试管中，每支装量20mL，包扎，置于121℃灭菌20min。

2．改良马丁氏培养基（用于真菌培养）250mL

依照改良马丁氏培养基试剂瓶上说明方法配制。配制250mL，分装于11支试管中，每支装量20mL，包扎，置于121℃灭菌20min。

3．0．9%无菌NaCl溶液

称取NaCl　9．0g，加水溶解成1000mL，置于121℃灭菌20min。

4．其他

2mL吸管2支，1mL吸管1支，分别包扎，置于121℃灭菌20min。

（二）操作步骤

1．菌液制备

接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，置于30～35℃培养18～24h，上述培养物用0．9%无菌NaCl溶液制成1mL含菌50～100CFU的菌悬液，用作阳性对照。

2．供试品的加入

取供试品11支，用碘酒棉球擦拭安瓿瓶外部，用小砂轮在安瓿瓶颈部划一环行线，再用75%酒精棉球将碘酒擦净，打开安瓿瓶颈部，按表3－37中接种的要求用无菌吸管吸取供试品、阳性对照液分别接种于不同培养基（要求严格进行无菌操作），混匀。阴性对照为空白培养液，未加其他成分。

表3－37无菌检查接种量

3．培养与观察

将接种的硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃，接种的改良马丁氏培养基置于23～28℃培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转接种至同种新鲜培养基中或划线于斜面培养基上，细菌培养48h，真菌培养72 h，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊或斜面培养基上是否有菌生长；或取培养液涂片、染色、镜检，判断是否有菌，记录于表3－38中。

表3－38　无菌检查培养观察

五、结果记录

若供试品管均澄清，或虽浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明实验结果无效，即生长微生物非供试品所含有。

当符合下列至少一个条件时，方可判断实验结果无效：①实验设备及环境不符合要求；②回顾过程中，发现有可能引起微生物污染的因素；③阴性对照管有菌生长；④供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品或无菌操作不当引起的；⑤阳性对照管无菌生长。

试验若经确认无效，应重做。重做时，重新取同量供试品，依法操作，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。

结论：你所检验的注射用水是否达到国家药典规定的无菌标准？

六、思考题

（1）哪些药品制剂需做无菌检查，怎样正确判断结果？

（2）无菌检查法为何要做阳性对照？若阳性对照管出现阴性结果是何原因？应如何处理？