血浆总胆固醇测定

血浆总胆固醇(TC)包括FC和CE两部分,其中CE占70%,FC占30%。TC在LDL中含量最多,其次是HDL、VLDL,CM最少。TC测定方法包括酶法和化学法。代表性化学法有ALBK法和高铁硫酸显色法,ALBK法测定结果与核素稀释-气相色谱-质谱法测定结果接近,为国际公认的参考方法;高铁硫酸显色法由于操作复杂,干扰因素多,现已不用。胆固醇的酶法测定始于20世纪70年代,由于操作简便,试剂无腐蚀性,尤其适用于自动生化分析,目前已成为胆固醇测定的主要方法。酶法中首选胆固醇氧化酶法。

【原理】 以胆固醇酯酶(cholesterol esterase,CHE)水解血浆中的胆固醇酯,生成游离脂肪酸和胆固醇;后者在胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase,CHOD)的作用下生成△4-胆甾烯酮和H 2 O2;终点产物的测定应用Trinder显色反应系统,在过氧化物酶(peroxidase,POD)催化下,H 2 O2与4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine,4-AAP)和酚结合,生成红色醌亚胺,其颜色深浅与标本中TC的含量成正比。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右。反应式如下:

【器材与试剂】

1.器材 恒温水浴箱、分光光度计、微量加样器、试管、刻度吸管。

2.试剂 不同厂家的试剂在组分上有些差别,具体含量见试剂盒说明书或相关文献。

(1)胆固醇液体酶试剂

GOOD缓冲液(p H6.7) 50mmol/L

胆固醇酯酶 ≥200U/L

胆固醇氧化酶 ≥100U/L

过氧化物酶 ≥3000U/L

4-AAP 0.3mmol/L

苯酚 5mmol/L

(2)胆固醇标准溶液5.17mmol/L(200mg/dl):精确称取200mg胆固醇,用异丙醇溶解并配制成100ml溶液,分装后,于4℃保存,临用前取出。亦可用定值血浆作为标准。

【操作】 取试管3支,按表7-5操作。

表7-5　胆固醇氧化酶法测定TC操作步骤

混匀后,37℃保温5 min,用分光光度计比色,于500 nm波长,以空白管调零,分别读出各管吸光度值。

【计算】 血浆总胆固醇(mmol/L)=胆固醇标准液浓度

【参考区间】 成年人血浆TC为3.3~5.2mmol/L。我国的血脂异常防治建议,以≤5.18mmol/L为合适水平,5.18~6.19mmol/L为临界范围(或边缘升高),≥6.22mmol/L为升高。

【质量保证】

1.检测标本可用血清,也可用肝素或EDTA·2Na抗凝血浆。

2.标本密闭保存,4℃可稳定1周,-20℃可稳定半年以上。

3.本法线性范围为≤19.38mmol/L(750mg/dl),若血浆胆固醇浓度超过线性范围,应将血浆稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。

4.试剂中酶的质量影响测定结果。

5.如果需检测游离胆固醇浓度,将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。

【应用评价】 该法标本用量少,操作简单,线性范围宽,特异性好,灵敏度高,既可用于手工操作,也可自动化分析,2003年中华医学会检验分会血脂专家委员会建议此法为胆固醇测定的常规方法。但本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等干扰,如胆红素>0.1g/L时有明显负干扰,血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平也使结果偏低。血红蛋白高于2g/L时会引起正干扰。

【临床意义】 TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标外,不能作为其他任何疾病的诊断指标,对于动脉粥样硬化和冠心病而言,高胆固醇血症是动脉粥样硬化的主要危险因素之一,与冠心病的发病率呈正相关。

血浆TC受性别、年龄、饮食习惯及运动等生理因素影响,随年龄增长而升高,70岁以后有所下降,中青年女性低于男性,50岁以后,女性高于同龄男性;长期高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高;缺少运动、脑力劳动、精神紧张等也可能使TC升高。

病理性血浆胆固醇升高分为原发性和继发性两大类:前者见于家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、混合性高脂蛋白血症等;后者见于糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎及妊娠等。

低胆固醇血症也分为原发性和继发性两大类:前者如家族性无β或低β脂蛋白血症;后者如甲状腺功能亢进、重症肝病、营养不良及慢性消耗性疾病等。