甲状腺激素测定

甲状腺激素的测定大多采用免疫标记法,包括放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TR-FIA)、化学发光免疫分析(CLIA)和电化学发光免疫分析(ECLIA)等,可直接测定血液中激素水平。

(一)血清总甲状腺素(TT4)和总三碘甲状腺原氨酸(TT3)测定

1.血清TT 4测定 TT 4是判断甲状腺功能最基本的筛选试验,也是诊断甲状腺功能减退(甲减)可靠而敏感的指标。血清中99.95%以上的T 4与蛋白结合,其中80%~90%与TBG结合,TT 4包括了与蛋白结合部分的总量。

血清总甲状腺素(TT 4)测定采用TR-FIA法。

(1)原理:竞争性荧光免疫分析。采用二抗包被反应孔,加入待检血清、铕标记T 4和鼠抗T4的单克隆抗体温育。抗T4单抗和包被在微孔板上的二抗结合的同时,样本中T4和铕标记T 4竞争结合抗T 4单抗上的位点,温育后洗板,加入解离增强液,将标记在复合物中的铕离子解离至溶液中,与增强液中有关成分形成螯合物微囊,发出的荧光强度与样本中的T 4浓度成反比。

(2)试剂:购买成套的商品试剂盒。

(3)操作:按仪器操作说明书进行。

(4)计算:以T 4标准品的浓度为横坐标(对数坐标),荧光强度为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘制标准曲线,根据样品的荧光强度即可查出相应T 4的浓度,通常以时间分辨荧光测定仪按设定模式直接打印,报告结果。

(5)参考区间(成年人):69~141 nmol/L(TR-FIA法);78~157 nmol/L(CLIA法);66~ 181 nmol/L(ECLIA法)。

(6)质量保证:按仪器操作说明书进行。

2.血清TT 3测定 TT 3是诊断甲状腺功能亢进(甲亢)最可靠和灵敏的指标,尤其是对T3型甲状腺功能亢进的诊断有特殊意义,这类甲状腺功能亢进血清TT4浓度不高,但TT3却显著增高。血清中T 3与蛋白结合量达99.5%以上,故TT 3也受血清TBG的影响,TT 3浓度的变化常与TT 4平行。

血清三碘甲状腺原氨酸(TT 3)测定采用CLIA法。

(1)原理:此法在反应体系中用过量的标记抗原与待测标本中的未标记抗原竞争特异性抗体的结合位点。

血清中待测抗原(T 3)与碱性磷酸酶标记抗原(ALP-T 3)竞争性与抗T 3单克隆抗体(m Ab)结合,当达到平衡后形成ALP-T 3-m Ab抗原-抗体复合物,用包被羊抗鼠IgG的磁性微粒捕获此复合物。在磁场的作用下,磁性微粒自行沉淀,经洗涤吸弃废液后加入发光底物AMPPD{3-[2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2二氧环乙烷]},在ALP的作用下AMPPD迅速发出稳定的光量子,与ALP-T 3-m Ab的产出量成正比,与T 3成反比。

(2)试剂:购买成套的商品试剂盒。

(3)操作:按仪器操作说明书进行。

(4)参考区间:1.3~2.7nmol/L(CLIA法);1.3~2.5nmol/L(TR-FIA法);1.3~ 3.1nmol/L(ECLIA法)。

(5)质量保证:标本应置于-20℃存放,避免溶血和反复冻融;试剂盒与待测血清应恢复至室温,每批试剂应分别做标准曲线,不同批号不能混用。

(6)临床意义:血清TT 3与TT 4增高主要见于甲状腺功能亢进,也用于病情观察和疗效监测。一般在甲状腺功能亢进初期与复发早期TT 3上升很快,约高于正常值4倍;TT 4上升缓慢,仅为正常值的2.5倍,故TT3是早期Graves病疗效观察及停药后复发的敏感指标。TT 3与TT4升高还见于活动性肝炎、妊娠等。

血清TT3、TT4降低 见于甲状腺功能减退,疾病后期或重症者TT3明显降低。此外, TT 3、TT 4降低还见于垂体功能低下、营养不良、肾病综合征、肾衰竭、严重的全身性疾病等。

TT 4测定受TBG等结合蛋白量和结合力的影响,TBG升高常见于高雌激素状态,如妊娠或用雌激素治疗、口服避孕药。低清蛋白血症(如肝硬化和肾病)、服用地西泮、睾酮等药物和先天性低TBG患者TT 4则降低。此时应测定FT 4和FT3才能有效地评价甲状腺功能。TT 4测定最好用血清,并尽量避免溶血,因为溶血对样品本身有稀释作用。

(二)血清游离甲状腺素(FT4)和三碘甲状腺原氨酸(FT3)测定

正常情况下,血浆结合型和游离型甲状腺激素之间存在着动态平衡,且只有游离型才具有生理活性,血清FT 3、FT 4不受TBG影响,其敏感性和特异性明显高于TT 3和TT 4,更能准切反映甲状腺功能,尤其在妊娠、雌激素治疗、家族性TGB增高或缺乏症等TGB变化较大时更为重要。目前认为,联合检测FT3、FT4和超敏TSH,是评价甲状腺功能的首选方案。

FT 4和FT3测定采用RIA法、CLIA法和ECLIA法等。RIA法测定FT 4和FT3分两步:首先将血清中所有蛋白(包括TBG)沉淀,然后测定上清液中FT 4、FT 3含量。

血清FT 3、FT 4测定(ECLIA法)

【原理】 待测抗原FT 3(FT 4)、生物素化的FT 3(FT 4)竞争性与钌标记的抗FT 3(FT 4)抗体结合形成免疫复合物,加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获上述免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒吸附于电极上,产生的光信号强度与待检样本中FT 3(FT 4)的含量成反比。

【试剂】 购买成套的商品试剂盒。

【操作】 按仪器操作说明书,只需分离血清上机,加样、分离、搅拌、温育、打印结果等均由仪器自动进行。

【参考区间】 FT4:12~22 pmol/L,FT3:3~7 pmol/L(ECLIA法);FT4:9~25 pmol/L, FT3:3~9 pmol/L(RIA法);FT4:9~17 pmol/L,FT 3:4.7~7.8pmol/L(TR-FIA法);FT 4: 11~20 pmol/L,FT 3:4~10 pmol/L(CLIA法)。

【质量保证】 溶血、脂血、黄疸标本与类风湿因子不影响结果。标本和质控品禁用叠氮钠防腐,应置于-20℃存放,避免反复冻融;试剂盒与待测血清应恢复至室温,避免过度振摇产生泡沫影响测试;每批试剂应分别做标准曲线,不同批号不能混用。

【临床意义】 FT 4和FT3的临床意义与TT4和TT 3相同,但因不受血清TBG影响,且代表具有生物活性的甲状腺激素的含量,因而具有更重要的临床价值。

1.甲状腺功能亢进 甲状腺功能亢进时FT 4、FT 3增高较TT 4、TT 3灵敏,尤其对TT 4、TT 3正常或轻度升高甲状腺功能亢进的诊断更有意义。观察甲状腺功能亢进的治疗效果, FT 4、FT 3的变化更明显。

2.甲状腺功能减退 甲状腺功能减退时TT4或FT4降低先于TT 3或FT3变化。多数口服T4治疗的患者,于服药后1~6h血中FT 4浓度达高峰,其升高程度与服药剂量有关。FT4是甲状腺素替代性治疗的有效指标。

3.孕妇 孕妇血中TBG明显增加。因此,FT 4、FT 3检测较TT 4、TT 3更为准确。肝素可使FT4、FT 3测定结果偏高。

(三)血清反T3(r T3)测定

r T 3与T 3结构基本相同,仅是三个碘原子在3、3′、5′位,主要来源于T 4,在外周组织(如肝、肾等)经5-脱碘酶作用生成。r T 3也是反映甲状腺功能的一个指标。血液中T 4、T 3和r T 3维持一定比例,可反映甲状腺激素代谢情况。血清r T 3测定常用RIA法和ICMA法。

【参考区间】 0.15~0.45nmol/L(RIA法)。

【临床意义】 r T3与T3属于异构体,但T3是参与机体代谢的重要激素,该过程消耗氧,而r T 3几乎无生理活性。r T 3增加,T 3减少,可降低氧与能量的消耗,是机体一种保护性机制。

1.r T3增高是甲状腺功能亢进或复发早期表现,治疗后下降较T3慢,与T4均低于正常示用药过量。

2.甲状腺功能减退时血清r T 3降低。r T 3是鉴别甲状腺功能减退与非甲状腺疾病功能异常的重要指标之一。

3.非甲状腺疾病,如心肌梗死、肝硬化、糖尿病、尿毒症、脑血管意外和某些癌症患者,血清中r T 3增加,且T 3/r T3比值降低,该指标对上述疾病程度的判断、疗效观察及预后估计均有重要意义。

4.羊水中r T 3浓度可判断胎儿的成熟程度,r T 3降低,有助于先天性甲状腺功能减退的宫内诊断。

(四)甲状腺摄131 I率试验

利用甲状腺摄取浓集碘的功能,给受试者一定剂量131 I,连续观察甲状腺区的放射性强度,以甲状腺摄取碘的速度(峰时间)和量(摄取率),间接反映甲状腺合成、分泌T 3、T4的能力。甲状腺功能亢进患者摄取碘的速度快(峰前移)、量多(摄取率提高),诊断符合率达90%;缺碘性甲状腺肿也可升高,但无峰前移。本法可鉴别不同原因的甲状腺功能亢进,但不能用于观察病情。甲状腺功能减退患者峰平坦,且摄131 I率下降。本试验受含碘食物和药物影响,试验前应按规定时间停用。还受某些疾病影响,如肾病综合征时增高,应激状态、吸收不良综合征、腹泻时降低等。