肾上腺髓质功能检查

(一)肾上腺素和去甲肾上腺素测定

1.HPLC-电化学法

参考区间:肾上腺素109~437pmol/L;去甲肾上腺素0.615~3.24nmol/L。

2.荧光法 包括乙二胺法和三羟吲哚法。

(1)乙二胺法:血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素经氧化铝吸附、阳离子交换树脂分离纯化,在稀酸中,肾上腺素氧化成肾上腺素红,后者与1分子乙二胺缩合,经脱水、脱氢生成荧光物质。去甲肾上腺素可与2分子乙二胺反应,生成荧光物质。

肾上腺素和去甲肾上腺素的反应产物均具有高于其母体的荧光强度。在最大激发波长(420nm)下,去甲肾上腺素在510nm的荧光强度比肾上腺素大1倍,而在580nm处肾上腺素的荧光强度比去甲肾上腺素大。在同一激发光波长作用下,两种物质具有不同的荧光波长和强度,与已知浓度的标准品比较,计算血浆中肾上腺素和去甲肾上腺素的含量。

(2)三羟吲哚法:用酸性氧化铝分离、提纯血浆中肾上腺素和去甲肾上腺素,在p H 6.0或p H 3.5条件下,用铁氰化钾使它们氧化成具有荧光的三羟吲哚,以荧光法测定其含量。在p H 6.0时,两者均被氧化,测出两者的总量。在p H 3.5时,肾上腺素被完全氧化,去甲肾上腺素仅少量被氧化,测出的是肾上腺素含量。去甲肾上腺素=总量-肾上腺素。

参考区间:肾上腺素,1.15mmol/L±0.16mmol/L;去甲肾上腺素,1.71mmol/L± 0.18mmol/L

临床意义:嗜铬细胞瘤时,两者均明显增高。如肾上腺素显著高于去甲肾上腺素,提示可能为肾上腺髓质嗜铬细胞瘤。原发性高血压、甲状腺功能减退、交感神经母细胞瘤等也可增高。降低见于甲状腺功能亢进、艾迪生病等。

(二)尿儿茶酚胺测定(离子交换色谱法)

【原理】 将尿液去蛋白,经阳离子交换树脂处理,在p H6.5条件下,游离型儿茶酚胺可选择性吸附于色谱柱上,改变条件洗脱后,经电化学检测器测定,与标准品(二羟苯胺)比较,根据洗脱峰保留时间和峰高的不同,对儿茶酚胺进行定性或定量分析。

【参考区间】 肾上腺素:2.7~108.7nmol/24h尿;去甲肾上腺素:82.4~470.6nmol/24h尿;多巴胺:420~2600nmol/24h尿。

【质量保证】 儿茶酚胺测定标本是血浆(血清)或尿液。在情绪稳定和安静状态下静脉采血。收集24h尿应及时检查或加防腐剂置冰箱暂时保存。试验前2d应限制饮茶、咖啡等兴奋性饮料。利用HPLC法测定尿液游离型儿茶酚胺。

(三)尿香草扁桃酸测定(Pisano法)

香草扁桃酸(VMA)是儿茶酚胺的主要代谢产物,尿VMA测定是内分泌检查的常规项目,因标本来源方便,一般实验室均可开展,有分光光度法和HPLC法。由于HPLC操作繁杂,临床多采用分光光度法。

【原理】 将尿液酸化,用乙酸乙酯抽提以VMA为主的酚、酸类化合物,加K2 CO3分离乙酸乙酯抽提液中的VMA,加入NaIO4,使VMA氧化成香草醛,甲苯抽提后,在360nm处测定其吸光度,与同样处理的标准管比较,求出VMA含量。也可用重氮化对硝基苯胺显色法进行测定。

【参考区间】 10~35μmol/24h尿(2~7mg/24h尿)。

【质量保证】 VMA分泌具有昼夜节律性,应收集24h尿液,置4℃冰箱或冰冻保存,加入6mol/L盐酸10ml防腐。本法易受食物及某些药物的干扰,如巧克力、咖啡、茶、香蕉、柠檬、多种拟肾上腺素和含多巴胺成分的药品等均可导致假阳性,芬氟拉明可致假阴性。测定前应对上述饮食和药物加以限制。本法操作步骤多,需严格遵守操作程序。

【临床意义】 尿儿茶酚胺和VMA测定可了解体内儿茶酚胺的水平。主要用于嗜铬细胞瘤的诊断和高血压的鉴别诊断。增高见于嗜铬细胞瘤、交感神经母细胞瘤、原发性高血压、甲状腺功能减退等;降低见于甲状腺功能亢进、原发性慢性肾上腺皮质功能减退等。