1.萘酚AS-BI磷酸钠(ICSH推荐方法)
(1)原理:萘酚AS-BI磷酸钠在pH9.5条件下,被白细胞中的酶水解为磷酸和芳香萘酚,后者与偶氮盐耦合形成不溶性的染料。
(2)操作步骤:新鲜干燥血涂片甲醛甲醇溶液中冷固定5s,水冲,晾干。置于萘酚AS-BI磷酸钠作用液中,于37℃温箱15min,水冲,晾干。Mayer苏木素染液复染10min,水洗,0.5%氨后返蓝,水冲,晾干。镜检。
(3)阳性结果:成熟中性粒细胞胞质酶活性部位,可以看到紫红色颗粒,细胞核为蓝色。骨髓中网状内皮细胞呈强阳性反应。
结果判断:(-)胞质内无颗粒;(+)有很少数颗粒,约占胞质面积1/4;(++)中等数量颗粒,约占胞质面积1/2;(+++)细胞质内大量颗粒,约占胞质面积3/4;(++++)阳性物充满了胞质,无空隙。
正常参考结果:阳性率:66.28%±27.75%。
阳性指数:103.28±69.93(中国医科院血液病医院细胞化学室标准)。
此试验影响因素较多,因此各实验室应建立自己的正常值。
2.萘酚AS-MX磷酸钠(ICSH推荐方法)
(1)原理:萘酚AS-MX磷酸钠在pH9.5被白细胞中酶水解产生磷酸和芳基萘酚,后者再与偶氮盐偶联形成不溶性染料。
(2)操作步骤:从毛细血管或肝素化静脉血制备血片,空气中干燥。将干燥的血片浸泡在冰盒中的固定剂5s,水洗,空气中晾干。置新配制的作用液中37℃温浴2h,水洗。藏红花红O复染2min,水冲。
(3)阳性结果:酶活性出现为不连续的分散的蓝色颗粒,在中性粒细胞胞质中,细胞核及浆染成红到浅红色,很少的淋巴细胞可呈现很弱的反应,网状细胞强阳性反应,所有其他血细胞无反应。结果判断:(-)无阳性颗粒;(+)5个染料颗粒;(++)5个以上到30个可以清楚计数的颗粒;(+++)30个以上呈不匀的颗粒;(++++)30个以上颗粒呈均匀分布,但在颗粒之间可以清楚辨别;(+++++)中性粒细胞胞质内充满颗粒,且颗粒之间不可清楚辨别。
正常值:阳性率:>68%;阳性指数:164-380。
(4)临床意义
①生理变化
a.年龄:NAP活性在新生儿很高,3个月开始降低,婴幼儿和儿童期仍略高于成年人,60岁以上老年期NAP活性降低。
b.应激状态:恐惧、紧张和剧烈运动等应激状态下NAP活性可增高。
c.性别:成年女性NAP活性较成年男性高,且随月经周期亦有改变,经前期增高,行经期降低,经后期恢复正常;妊娠2~3个月NAP积分值轻度增高以后逐月呈阶梯式升高,分娩时达高峰,产后降至正常范围。
②病理变化
a.白血病类型的鉴别
急性髓系白血病:NAP阳性率或阳性指数一般减低,亦可正常,并发感染时可稍增高。
急淋:NAP积分明显增高,有利于急淋和急非淋的鉴别。
慢粒:慢性期(无继发感染时)NAP阳性率显著减低,甚至是“0”,缓解期可恢复正常范围,加速期和急变期NAP积分值可有不同程度增高。该检测可作为观察慢粒疗效和预后的一项指标,也是与类白血病反应鉴别的重要检测项目。
慢淋、多发性骨髓瘤和原始神经母细胞瘤等,NAP的阳性率和阳性指数往往增高。
b.其他血液病
再障NAP阳性率和阳性指数增高;阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)一般减低;MDS正常或减低。真性红细胞增多症NAP阳性率和阳性指数正常或增高,继发性红细胞增多症NAP值正常或降低,是两者的鉴别方法之一。骨髓纤维化、原发性血小板增多症等NAP略有增高。恶性组织细胞病NAP积分值明显减低,而反应性组织细胞增多时NAP往往增高,有助两者鉴别。感染:细菌性感染时NAP积分值增高,其中球菌性较杆菌性感染为高;急性感染较慢性感染高;病毒感染或寄生虫感染、立克次体感染NAP积分值一般正常或降低。该检测对鉴别细菌感染与其他感染有一定价值。
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