低温或冷冻能保存皮肤及其活力是因为：低温冷冻能抑制细菌的繁殖，一般细菌在0～3℃时繁殖即被抑制；低温冷冻降低了皮肤细胞的代谢，从而能减少对皮肤细胞有害的代谢产物的累积，温度越低，保存时间越长。但低温冷冻对细胞有一定损害，在降温速度较慢时（慢冻），细胞外水逐渐结冰，细胞内水因有细胞膜的保护结冰较慢。细胞外结冰的结果使细胞外盐浓度逐渐升高，形成对细胞的高渗效应，细胞内水外渗，结果致胞膜受损，这是一种水与盐失衡的损伤；若温度下降较快（速冻），则细胞内水未能渗出而结冰，结果细胞内形成大量冰晶，细胞内冰晶可以损伤线粒体等细胞器。长期以来，学者们认为后者对细胞更为有害而趋向于“慢冻”存皮，即在－30℃前，控制温度降速每分钟下降1℃，以后可加快，为使冷冻对细胞的影响降至最低限度，在皮片降温前，先行保护剂“抗冻”处理。保护剂是一类大分子亲水物质，常用二甲基亚砜或甘油，对它们在低温时保护细胞的机制还不太清楚，可能是因为它们的亲水性，可以干扰低温时细胞内外冰晶的形成，从而减轻冷冻对细胞的损害。
（一）低温保存皮的制备
1．采皮 皮源要新鲜，夏天死亡时间在6～8h；冬天12～16h。在冷冻条件下保存的时间可适当延长。死于传染病、恶性肿瘤、严重皮肤病，有明显尸斑、恶臭、表皮易擦下者不能用。用手术刀连同部分脂肪按双上、下肢，躯干（除肛周、会阴）切下共5～6大块，脂肪太厚易使制皮困难，太薄则易穿孔、采取费时。夏天远途采皮要带保温容器及冰块。
2．清洗 以清水冲去血清，用肥皂水洗去皮面污垢，剃毛置4℃冰箱备制。
3．制皮 用鼓式取皮机将皮块反贴于鼓面，去除脂肪及部分真皮，制成大张中厚皮片，制皮过程较长，为避免长时间将皮暴露于室温下，制皮应在空调室进行，待制的皮块及制成的皮片均放入4℃冰箱中暂存直至全部制皮过程结束。
4．消毒 制好的皮片以0．1%苯扎溴铵（新洁尔灭）或0．05%氯己定（洗必泰）浸泡消毒10min，消毒剂可影响皮片活力，不宜过度浸泡。泡毕以无菌盐水彻底冲洗3次，皮片置4℃冰箱中。
5．抗冻 保护剂可用10%二甲基亚砜（DMSO）、林格液或Krebs液加入抗生素，地塞米松（每500ml 10%的DMSO加青霉素80万U，庆大霉素8万U，地塞米松5mg）。保护剂于制皮前配制放入4℃冰箱预冷。保护剂对皮片活力具有一定影响，经保护剂处理的皮片应尽快进行冷冻。因此要控制“抗冻”时间，经验证明浸泡5min即可。皮片处理在4℃冰箱中进行时间勿过长，“抗冻”处理、装袋和冷冻一气完成，逐块相继进行直至全部皮片处理完毕。
6．装袋 经“抗冻”处理的皮片立即在无菌条件下装入无菌塑胶袋中，一是为了保持无菌，便于操作。二是皮片装入塑胶袋后可减缓降温速度，以达到慢冻要求。装袋时不必洗掉保护剂，皮片装袋只能重叠成双层，同时放置要平整，不然将影响冷冻与复温的效果，放入标有制皮日期和皮片大小等的标记，密封袋口，立即冷冻储存。
（二）低温冰箱贮存
市售低温冰箱有－30℃、－60℃、－80℃及－135℃等，温度越低，贮存时间越长，但价格越贵。－80℃即可保存皮片长达1年，较适用于一般单位，低温冰箱可单独用作贮存容器，也可作为液氮慢冻时的过渡容器。置低温冰箱贮存的皮片需在放入低温冰箱前做抗冻处理，皮片经装袋后再放入低温冰箱可较长期贮存，但应随时注意冰箱运行是否正常。
（三）液氮存皮
液氮温度低（－196℃），1965年Bergren报道用液氮保存皮肤成功后已广为接受。液氮保存皮肤的最长时间尚不清楚，无疑可以年计，液氮保存皮肤有慢冻法及速冻法两种。
1．慢冻法 将经过抗冻处理的皮片装入塑料袋后先放入二氧化碳干冰（－78℃）或－80℃低温冰箱中，经12h温度恒定后，转放液氮中。
2．速冻法 将塑袋装好的皮片直接投入液氮中。速冻法操作较慢冻法简便，毋须行中间温度过渡，省时省力，且经保存后的皮肤活力不逊于慢冻法，但保护剂的配方要略加更改强化，第三军医大学的配方：10%二甲基亚砜，10%丙烯乙二醇，10%聚乙烯乙二醇的Kreb磷酸缓冲液。抗冻处理30min，速冻法的依据是降温达到一定速度时水分子运动受抑制，细胞内容物呈玻璃化而不会结成冰晶，液氮的降温速度是否已达到玻璃化的要求尚无明确的结论。液氮存皮需要保温良好的液氮容器，同时每周需补充液氮。
液氮与低温冰箱比较：液氮保存期长，温度稳定；但成本高，需特殊容器，当地要有液氮供应点，需要定期加液氮。而低温冰箱成本低，容易管理；但保存期较液氮短，温度受供电影响。
（四）复温
深低温（低温冰箱、液氮）贮存的皮片，使用前均需复温软化。复温可用40～42℃温水，将皮片连同塑料袋同时浸入水中软化，复温必须在3min内完成，已软化的皮应即离开热水。取出的皮块以无菌生理盐水充分冲洗，去除残留的保护剂。
（五）注意事项
为保证冷冻皮有良好的移植效果，应注意制皮和复温的每一环节。
1．皮源务求新鲜，无皮肤病、传染病的恶性肿瘤等。
2．适当控制消毒与抗冻时间。
3．抗冻、装袋、冷冻逐块相继完成，勿成批同时处理。
4．复温要求快速，用水量要足。水量太少，水温下降较快，影响复温速度。
5．切痂后新鲜创面如要接受低温皮移植，最好包扎固定8～10d，过早启视容易影响皮片与移植床血循环的建立，移植的冷冻皮不易看到皮片转红，且表皮易脱，只要贴附牢固，不应视为失败。肉芽创面用低温皮存活差。
6．复温后的冷冻皮不宜再长期冷藏使用。
（周一平）
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