【原理】 粒细胞及部分单核细胞胞质内的颗粒中含有过氧化物酶（peroxidase，POX），此酶能分解过氧化氢，释放出初生态氧，使联苯胺氧化成氧化联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠在细胞内结合成蓝色颗粒，再进一步氧化成棕黑色化合物，定位于酶活性的细胞质内。
过氧化物酶染色的化学反应过程如下：
【试剂】
1.复方联苯胺染液 联苯胺（benzidine）0.3g，95%乙醇99.0ml，36%硝普钠（亚硝基铁氰化钠）（sodium nitroprusside）1.0ml。以上试剂混匀后装在棕色瓶内可保存8～10个月。
2.过氧化氢溶液 先配成3.0%的溶液储存，用时吸取1滴加入盛有5ml蒸馏水的试管中，混匀。
【操作方法】
1.新鲜干燥的涂片标本上滴加复方联苯胺溶液5～8滴，作用lmin。
2.再加入等量的过氧化氢溶液，作用4～8min。
3.流水冲洗。
4.标本在空气中晾干后用瑞氏姬姆萨染液复染，较一般染色时间要略长一些。
（二）盐酸联苯胺过氧化物酶染色
【原理】 粒细胞系统及部分单核细胞胞质内的颗粒中含有过氧化物酶，此酶能分解过氧化氢，释放出初生态氧，使盐酸联苯胺氧化成氧化联苯胺，后者与硫酸锌、醋酸钠在细胞内结合成蓝黑色颗粒，沉着于酶活性的胞质内。
【试剂】
1.固定液（Ⅰ液） 10%甲醛乙醇溶液（37%甲醛10ml，无水乙醇90ml）。
2.复方盐酸联苯胺液（Ⅱ液）30%乙醇200ml，盐酸联苯胺0.6g，3.8%ZnSO4·H2O（0.132M）2.0ml（1M＝1mol/L），CH3COONa·2H2O 2.0g，3%过氧化氢1.4ml，1N氢氧化钠3.0ml（1N＝1mol/L），沙黄O（潘红花红T）0.4g（不染核时可不加）。配制时必须按上述次序加入，每加一种试剂均需充分混合均匀，联苯胺盐不易全溶，加入硫酸锌后即形成沉淀，但加入其他试剂后即行溶解，最后pH应为6.0±0.05；过滤备用，室温可保持6个月（棕色瓶内）。
【操作方法】
1.血片、骨髓涂片于固定液中固定10s。
2.流水冲洗。
3.涂片放在染架上，滴加Ⅱ液5～6滴，复染30s。
4.流水冲洗晾干后直接镜下观察。
5.观察细胞形态，可用瑞氏姬姆萨复染20min，流水冲洗，待干，镜检。
【结果】
1.染色结果 阳性者在细胞质内有棕黑色或蓝黑色颗粒沉着。阳性程度参考标准：无颗粒沉着（-）；颗粒细小，分布稀疏（±）；颗粒较粗，常呈局灶性分布（＋）；颗粒粗大、分布较密，占胞质1/2～2/3（
）；颗粒粗大，呈团块状分布（
）；颗粒布满整个细胞，可覆盖胞核（
）。
2.正常血细胞染色反应 ①粒细胞系：原粒细胞一般呈阴性反应，少数可出现少量棕黑色或蓝黑色颗粒。以后各阶段均呈阳性反应，并随细胞的成熟程度阳性反应逐渐增强。但衰老的粒细胞酶活性降低其反应程度减弱。嗜酸粒细胞阳性反应程度最强。嗜碱粒细胞呈阴性反应。②单核细胞：呈阴性或弱阳性反应，其颗粒细小，分布稀疏。③其他：淋巴细胞、幼红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞和血小板呈阴性反应；巨噬细胞呈阳性反应。
【临床意义】 有助于急性白血病类型的鉴别。
1.急性粒细胞白血病 分化好的原始粒细胞呈阳性反应，颗粒较粗大而局灶性分布。分化差的原始粒细胞可呈阴性反应。
2.急性淋巴细胞白血病 原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应。值得注意的是急性淋巴细胞白血病患者骨髓片中POX染色阳性原始细胞可高达3%，这并非是原始淋巴细胞而是原始粒细胞。
3.急性单核细胞白血病 原始单核细胞和幼单核细胞呈阴性或弱阳性反应。
4.急性早幼粒细胞白血病 白血病性早幼粒细胞呈强阳性反应，可与急性单核细胞白血病鉴别。
5.红白血病 原始粒或原幼单核细胞可呈阳性或弱阳性反应；原始红细胞和幼红细胞呈阴性反应。
6.恶性组织细胞病 异常组织细胞呈阴性反应。
【注意事项】
1.用新鲜骨髓涂片或血涂片。
2.3%过氧化氢溶液需保证质量，其稀释液用时新鲜配制。
3.染色时加过氧化氢稀释液必须与联苯胺充分混合，以使染色均匀。
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