【原理】 苏丹黑B(Sudan black B,SBB)是一种脂溶性染料,这种染料可溶解于胞质内的含脂结构中,因此可将细胞中的中性脂肪、磷脂及胆固醇等脂类显示出来,甚至可显示微细结构中的隐性脂类。这些脂类经苏丹黑染色后呈棕黑色或深黑色颗粒,定位于胞质中。
【试剂】
1.固定液 10%甲醛盐水。
2.1%苏丹黑B(SBB)乙醇溶液 取苏丹黑B1g溶解于70%乙醇100ml内。
3.复染液 2%甲绿水溶液。
【操作方法】
1.将新鲜干燥涂片标本置于10%甲醛盐水中固定10min。
2.用流水冲洗10min,晾干。
3.放入1%苏丹黑B乙醇溶液中,37℃水温箱1~2h室温中需20h。
4.浸入70%乙醇中脱色3min,晾干。
5.用2%甲绿水溶液复染2min,流水冲洗,晾干后镜检。
对照标本在行苏丹黑B染色之前用有机溶剂提取脂类。方法为:①用热吡啶浸24h;②冷丙酮浸24h;③乙醚、氯仿及丙酮等量混合,浸24h。
①法及②法可溶解磷脂,③法可溶解一般脂肪。
【结果】
1.染色结果 阳性反应呈棕黑或深黑色颗粒,定位于胞质中,阳性程度参考标准与POX染色相同。
2.正常血细胞染色反应 ①粒细胞系,原粒细胞常呈阴性反应,有的可出现少量阳性颗粒。自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应,并随细胞的成熟程度阳性颗粒逐渐增多、增强;嗜酸性粒细胞的颗粒较粗大,着色偏棕色,颗粒边缘深染而中央淡染或无色;嗜碱性粒细胞呈阴性或阳性反应,颗粒大小不一。②单核细胞呈弱阳性反应,颗粒细小、少而弥散分布。③淋巴细胞、幼红细胞、巨核细胞、血小板均呈阴性反应。
【临床意义】 SB染色一般与POX染色结果相同,两者临床意义也相似。
有助于急性白血病类型鉴别:①急性粒细胞白血病:分化好的原粒细胞可出现阳性反应,分化差的则呈阴性反应。②急性淋巴细胞白血病:原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应。③急性单核细胞白血病:原始单核细胞一般呈阴性反应,少数呈阳性反应,颗粒少而细小、分布弥散。④慢性粒细胞白血病急性变时,原始粒细胞呈阴性反应。
【注意事项】 用70%乙醇脱色需充分,以免出现假阳性。
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