特异性酯酶染色法

【原理】　氯醋酸AS-D萘酚酯酶（naphythol AS-D chloroacetate esterase，AS-D NCE）染色，基质液中的氯醋酸AS-D萘酚被血细胞内的氯醋酸AS-D萘酚酯酶水解形成萘酚AS-D，再与重氮盐偶联形成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内酯酶所在部位。

【试剂】

1.固定液 甲醛-丙酮缓冲液含磷酸氢二钠20mg、磷酸二氢钾100mg、蒸馏水30ml、丙酮45ml、甲醛25ml，调节pH值至6.6。

2.温育液 ①甲液：将4%副品红（2N盐酸溶解）0.1ml及4%亚硝酸钠0.1ml混合于一尖底管中；②乙液：将氯醋酸AS-D萘酚4mg加入N，N-二甲基甲酰胺2ml中，混合于另一尖底管中；③将甲液加入0.067mol/L磷酸缓冲液38ml（pH7.6）中，再将此液与乙液混合，颜色为鲜红色。

3.复染液 1%甲绿溶液或苏木精溶液。

【操作方法】

1.新鲜干燥的血涂片或骨髓涂片，置于甲醛-丙酮缓冲液中固定30s，流水冲洗，晾干。

2.浸入温育液中，于37℃水浴箱中作用1h，流水冲洗5min，晾干。

3.用1%甲绿或苏木精溶液复染5min，流水冲洗，干后镜检。

【结果】

1.染色结果阳性反应呈鲜红色或深红色颗粒状沉淀，定位于胞质内。

2.正常血细胞染色反应①粒细胞系，原粒细胞呈阳性或阴性反应；自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，酶活性并不随细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性反应；嗜碱性粒细胞呈阳性反应。②单核细胞呈阴性反应，个别呈弱阳性反应；淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、巨核细胞和血小板均呈阴性反应。

【临床意义】

1.有助于急性白血病类型的鉴别 ①急性原粒细胞白血病：大多数原粒细胞可出现阳性反应；②急性早幼粒细胞白血病：早幼粒细胞呈强阳性反应；③急性单核细胞白血病：原始单核细胞几乎均呈阴性反应，个别可呈弱阳性反应；④急性淋巴细胞白血病：原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应。

2.AS-D NCE阳性反应几乎仅出现在粒细胞系统，较过氧化物酶染色更具特异性，因此又称“粒细胞酯酶”。

【注意事项】

1.应为新鲜的骨髓涂片或血涂片。

2.缓冲液应先放入37℃水浴箱中，温育5min。

3.染色后应及时观察结果并记录，长期保存会逐渐褪色。