【原理】 血细胞中的酯酶在pH中性条件下水解基质液底物中相应的萘酚基产生萘酚，萘酚再与重氮盐偶联，形成不溶性有色沉淀，定位于酯酶活性部位。根据染色时底物的不同，可分为以下三种方法。
（一）α-醋酸萘酚酯酶（α-naphythyol acetate esterase，α-NAE）染色
【试剂】
2.温育液 α-醋酸萘酚10mg溶解于50%丙酮水溶液1ml，再加入0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）50ml，最后放入坚固蓝B（B盐）5 0mg，混匀。
3.复染液 1%甲绿水溶液或0.2%核固红水溶液。
【操作方法】
1.新鲜干燥涂片标本在10%甲醛生理盐水溶液中固定5min，流水冲洗，晾干。
2.置入温育液37℃水浴箱中作用1h，流水冲洗，晾干。
3.用1%甲绿复染或0.2%核固红水溶液复染5min，流水冲洗，干后镜检。
【结果】
1.染色结果 阳性反应在胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀，尤其在近核膜处明显。阳性程度参考标准：无色素沉淀（-）；淡灰黑色沉淀（±）；胞质1/2区域出现黑色或棕黑色沉淀（＋）；胞质3/4区域出现灰黑色或棕黑色沉淀（
）；胞质全部区域出现棕黑色沉淀，但密度较低（
）；胞质全部被深黑色团块状沉淀充满，密度甚高（
）。
2.氟化钠抑制试验 同样配两缸基质液，其中一缸加入75mg氟化钠，混匀。在两缸内各放一张涂片标本按上述方法进行染色。镜检时两张标本进行对照，用油镜计数100个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率与阳性积分，并按下列公式计算抑制率。
抑制率（%）＝［抑制前阳性率（或阳性积分）-抑制后阳性率（或阳性积分）］/抑制前阳性率（或阳性积分）×100
3.正常血细胞染色反应 ①单核细胞及组织细胞呈阳性反应，且能被氟化钠抑制。②各期粒细胞呈阴性反应，少数可呈弱阳性反应，不能被氟化钠抑制。③幼红细胞、巨核细胞和血小板呈阳性反应，可能被氟化钠抑制；淋巴细胞大多呈阴性反应，少数可呈弱阳性反应，不能被氟化钠抑制；浆细胞呈阴性反应。
【临床意义】 有助于急性白血病类型的鉴别。
1.急性单核细胞白血病 原始单核细胞可呈阳性或强阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制。
2.急性粒细胞白血病 原始粒细胞呈阴性反应，个别可呈阳性反应，但此反应不能被氟化钠抑制。
3.急性早幼粒细胞白血病 白血病性早幼粒细胞可呈阳性或强阳性反应，不能被氟化钠抑制。此反应可与急性单核细胞白血病鉴别。
4.急性淋巴细胞白血病 原始淋巴细胞和幼淋巴细胞呈阴性反应，有时T淋巴细胞白血病可呈阳性反应，但不能被氟化钠抑制。
5.急性粒-单核细胞白血病 部分白血病细胞呈阳性反应，单核细胞系细胞能被氟化钠抑制。
6.红血病和红白血病 异常幼红细胞可呈阳性反应。
【注意事项】
1.骨髓涂片或血涂片要新鲜。
2.温育液中，每加一种试剂，都要充分混匀。
（二）醋酸AS-D萘酚酯酶（naphythyol AS-D acetate esterase，AS-D NAE）染色
【试剂】
1.固定液 40%甲醛溶液。
2.温育液 将醋酸AS-D萘酚5mg溶于丙酮溶液0.5ml及丙二醇0.5ml内，吸0.067mol/L磷酸缓冲液（pH7.0）20ml慢慢滴加入上述混合液中，要充分混摇均匀，再加入坚固蓝B（B盐）20mg，混匀。
3.复染液 苏木精溶液。
【操作方法】
1.新鲜涂片标本用40%甲醛蒸气固定5～10min后流水冲洗，晾干。
2.置入温育液中于37℃水浴箱内作用1h，流水冲洗10min，晾干。
3.用苏木精溶液复染1～2min，流水冲洗，干后镜检。
【结果】
1.染色结果 阳性反应为胞质内出现蓝色颗粒沉淀。阳性程度参考标准：无蓝色颗粒沉淀为（-）；颗粒少量、稀疏为（±）；胞质内1/2区域出现颗粒沉淀为（＋）；胞质内3/4区域出现颗粒沉淀为（
）；胞质内全部区域出现颗粒沉淀为（
）；胞质内全部区域出现浓集的颗粒沉淀（
）。
2.氟化钠抑制试验同a-NAF。
3.正常血细胞染色反应 ①粒细胞系，原粒细胞呈阴性或阳性反应；早幼粒细胞至成熟中性粒细胞呈（＋）～（
）阳性反应，不被氟化钠抑制。②单核细胞一般为（
）～（
）阳性反应，且能被氟化钠抑制。③淋巴细胞呈弱阳性反应，不能被氟化钠抑制；巨核细胞和血小板呈阳性反应；早期幼红细胞可呈阳性反应。随幼红细胞的成熟阳性反应逐渐减弱，不被氟化钠抑制。
【临床意义】 有助于鉴别急性白血病类型。
1.急性粒细胞白血病 白血病性原始粒细胞可呈阳性反应，且不被氟化钠抑制。
2.急性单核细胞白血病 原始单核细胞可呈阳性或强阳性反应，幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，且被氟化钠抑制。
3.急性粒-单核细胞白血病 呈阳性反应的白血病细胞部分能被氟化钠抑制，为单核系，部分不被抑制为粒系。
【注意事项】 骨髓涂片或血涂片需新鲜标本。
（三）醋酸AS萘酚酯酶染色
基质液中底物用AS萘酚5mg，其他试剂、操作方法、结果、临床意义均同AS-D NAE。
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