血浆游离血红蛋白检测

【原理】　血浆游离血红蛋白检测较常用的方法是色原比色定量法。游离血红蛋白在酸性条件下具有过氧化物酶样作用，能使无色的邻甲苯胺氧化为稳定的有色物质。其颜色的深浅与血红蛋白的含量呈正比，可借助分光光度计测定其吸光度，用已知浓度的血红蛋白溶液为标准进行计算，得出被测血浆血红蛋白浓度。

【试剂】

1.1%邻-甲联苯胺。

2.新鲜配制的1%过氧化氢。

3.10%冰醋酸溶液。

4.100mg/L血红蛋白标准液制备取抗凝静脉血，离心去除血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，以压积红细胞的体积为准，加入等体积的蒸馏水和1/2体积的四氯化碳或氯仿，猛烈振摇5～10min，2 500r/min离心20min，将血红蛋白液分离出来，以氰化高铁血红蛋白法测定其浓度，并用生理盐水调节至100g/L。此为储存标准液，低温冰箱保存。用时稀释成100mg/L的标准应用液。

【操作方法】

1.取3只试管，按表7-4加入各种试剂。

表7-4　血浆游离血红蛋白测定操作方法

2.室温放置10min后，波长515nm，以空白管调零点，测定各管光密度。

3.计算 血浆游离血红蛋白（mg/L）＝测定管光密度/标准管光密度×100

【参考值】　正常＜40mg/L。

【临床意义】　正常人血浆中仅含微量游离血红蛋白，且大部分与Hp结合为Hp-Hb复合物。血浆游离血红蛋白浓度增加是血管内溶血的特征，特别高的游离血红蛋白值，如高达10g/L仅见于严重的血管内溶血。在大多数遗传性溶血性贫血的病人是正常的（包括遗传性球形红细胞增多症），如果是100～600mg/L的轻度增加，见于镰形细胞贫血和轻型地中海贫血。严重的获得性的免疫性溶血，其值可达1g/L。如血浆游离血红蛋白＞500mg/L，血浆出现肉眼可见的淡红色。如血浆游离血红蛋白＞lg/L，可直接用氰化高铁血红蛋白法测定。

【注意事项】　采血和分离血浆过程中，应严格防止发生体外溶血，以免造成假阳性。试验用的吸管、试管等器材，用前必须用盐酸浸泡24h，流水冲洗后用蒸馏水洗3次，以避免血红蛋白污染而造成假阳性。过氧化氢溶液的浓度要准确，应新鲜配制。