血清结合珠蛋白检测

【原理】　血清结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）是肝脏合成的一种糖蛋白，能与血浆或血清中的血红蛋白结合形成稳定的复合物。测定时在血清中加入一定量的血红蛋白液，用电泳的方法使游离血红蛋白与结合的复合物分离，经盐水洗脱后，用比色法测定Hp-Hb复合物中Hb的量，从而得到血清中Hp的含量。

【试剂】

1.TEB缓冲液（pH8.6） 三羟甲基氨基甲烷（Tris）55g、乙二氨四乙酸（EDTA）17g、硼酸12g、加蒸馏水至1 000ml，为储存液。用前3倍稀释为电泳槽缓冲液，6倍稀释为浸膜缓冲液。

2.丽春红染液 丽春红0.5g，溶于5%三氯乙酸100ml中。做膜染色时，先浸染3min，取出后在3%乙酸溶液中漂洗3次，洗脱多余的染液。

3.联苯胺染液 取联苯胺0.2g，溶于200ml乙醇中，取此液5ml、3%的乙醇液10ml、10g/L亚硝基铁氰化钾1ml混合。染色5min后用蒸馏水（内加数滴乙醇）洗脱。

【操作方法】　取被检血清0.09ml，加30g/L Hb液0.01ml，置于37℃水浴20min。取上述温育液20μl在浸透TEB缓冲液的醋酸纤维薄膜（8cm×3cm）距阴极1cm处点样，并架在电泳槽支架上。在180V电压下电泳1h左右，出现清晰的两条带为止。取下醋酸纤维薄膜，立即剪下前面的（相当于α2球蛋白位置）Hp-Hb带和后面的（相当于β球蛋白位置）未结合Hb带，分别用3ml等渗盐水洗脱，并不时轻轻振摇，20min后，用分光光度计在415nm波长处测定吸光度。电泳后如果只见一条区带，应将膜纵切开为两条，分别用丽春红和联苯胺染色，比较区带的位置，判定是Hp减少还是缺如，因为在Hp减少的情况下，Hp-Hb区带着色很浅，区带很细，须染色后才能看到。联苯胺染色以确定是否含血红蛋白。

【参考值】　正常平均值为0.85g Hb/L；范围0.5～1.5g Hb/L。

【临床意义】　大部分患者Hp减低的最常见原因是Hp的消耗增加，排除其他组织破坏的疾病后，是血管内溶血的确诊试验。Hp减低也可见于红细胞无效造血、遗传性无结合珠蛋白血症、肝脏疾病（特别是肝硬化）、尿毒症、系统性红斑狼疮、高血压、妊娠、口服避孕药和雌激素治疗病人。

任何原因导致的组织破坏或炎症时，Hp均非特异性地升高，如各种急、慢性感染、肿瘤、1/3的胆道阻塞、肾炎、溃疡性结肠炎、消化性溃疡、动脉疾病、结缔组织病、心肌梗死后、肉芽肿和使用类固醇和雄激素等。Hp的含量受年龄影响。新生儿常是无结合珠蛋白血症，一般3个月时有可能检测到结合珠蛋白，20岁以前达到成人水平。