红细胞渗透脆性孵育试验

【原理】　取肝素抗凝血，37℃24h孵育，以消耗红细胞内的ATP和能量。此后再与以磷酸盐缓冲液配制的pH＜7.4系列低渗盐水以1:100的比例混合，室温放置一定时间后，540nm光电比色，得出各管溶血率并绘制曲线，求出中间脆性（50%的溶血率）盐水浓度。

【试剂】　pH 7.4 10g/L氯化钠缓冲液 NaCl 2.0g，Na2HPO42.73g，NaH2PO4·H2O 0.34g，溶于200ml容量瓶内加水至200ml。可保存数月。

【操作方法】

1.取被检者和正常对照者静脉肝素抗凝血2ml，放入干燥无菌有塞小瓶内，37℃孵育24h，取10ml刻度离心管14支，按表7-6配制不同浓度的盐水溶液。

2.将上列各管混匀后分装为两管，每管5ml。一组加被检者肝素抗凝血0.05ml，一组加正常对照者抗凝血液0.05ml后，轻轻颠倒混匀2～3次。置室温20min后各管再轻轻混合。2 000r/min离心5min，取上清液比色。波长540nm，以第14管作对照，测定各管吸光度，并以第1管上清液为100%溶血，算出每管的溶血率。以溶血率为纵坐标，NaCl溶液浓度为横坐标绘制曲线，从曲线中找出50%溶血率的盐水浓度，就是红细胞的中间脆性（median corpuscular fragility，MCF）。

表7-6　红细胞孵育渗透脆性试验操作方法

【参考值】　红细胞渗透脆性孵育试验参考值见表7-7。未孵育：50%溶血为4.00～4.45g/L NaCl，37℃24h孵育；50%溶血为4.62～5.90g/L NaCl。

表7-7　红细胞孵育渗透脆性试验参考值

【临床意义】　红细胞孵育渗透脆性试验对遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症及自身免疫性溶血性贫血有临床诊断价值。该方法比简易半定量法敏感，对轻型红细胞膜缺陷者尤有价值。对丙酮酸激酶缺乏症等酶缺陷症导致的溶血性贫血的诊断亦有价值。孵育前脆性正常，孵育后脆性增加。