酸化甘油溶血试验

【原理】　酸化甘油溶血试验（acidified glycerol lysis test，AGLT）的原理：甘油可阻止低渗溶液中水快速进入红细胞，使溶血过程缓慢。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜脂质减少，促进红细胞破坏。记录吸光度下降为起始吸光度50%的时间即为AGLT。当红细胞膜蛋白缺陷时，在微酸性的甘油缓冲溶液中比正常红细胞溶解速度加快，导致红细胞悬液的吸光度降至50%的时间（AGLT50）明显缩短。

【试剂】

1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液 取0.1mol/L Na2HPO4溶液490ml，0.1mol/L KH2PO450ml，混合，校准pH 6.85±0.05分装，-20℃保存可用半年。

2.等渗PBS 取上液1份加0.154mol/LNaCl溶液9份混合，4℃保存，可用4周。

3.0.3mol/L甘油试剂 取等渗PBS 32ml，加甘油2.2ml，加水至100ml。4℃保存，可用4周。

【操作方法】　肝素或EDTA盐抗凝血或末梢血20μl加到平衡等渗磷酸盐缓冲盐液5ml中，制成红细胞悬液。其浓度以起始吸光度0.40～0.60为宜。取一光径lcm的比色皿，加入等渗PBSlml、甘油试剂2ml，混合调零。另取一比色皿加入红细胞悬液lml，快速加入2ml甘油试剂，立即读取吸光度（将此吸光度作为100%），同时开动秒表，每隔20s读取吸光度一次，直至300s。然后每隔5min读取一次，至30min。起始吸光度下降一半的时间即为AGLT50结果。

【参考值】　正常人AGLT50＞290s。

【临床意义】　该试验对遗传性球形红细胞增对症（AGLT50＜150s）的诊断比较特异和敏感。有些自身免疫性溶血性贫血AGLT50＜150s，HbH患者红细胞溶解明显减少，与缺铁性贫血患者不同，可用该试验作为初筛试验。

【注意事项】

1.本试验最适温度为25℃±2℃。

2.每次试验要有阳性对照。

3.用0.3mol/L甘油制备红细胞悬液时，动作要快而准确，甘油的氧化会造成假阳性。

4.pH6.85±0.05磷酸盐缓冲等渗液必须准确配制。