亚硝酸盐怎么形成高铁血红蛋白

【原理】　高铁血红蛋白还原试验（methemogobin reduction test，MHb）是在血液中加入亚硝酸盐使红细胞中的亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白，正常红细胞的G6PD催化戊糖旁路使NADP（辅酶Ⅱ氧化型）变成NADPH（辅酶Ⅱ还原型），反应中脱的氢通过加入亚甲蓝的递氢作用而使高铁血红蛋白（Fe3＋）还原成亚铁血红蛋白（Fe2＋）。当G6PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降，甚至不还原。高铁血红蛋白还原的多少和还原的速度可通过比色测定，从而间接反应了G6PD的活性。

【试剂】

1.0.18mol/L亚硝酸钠和0.28mol/L葡萄糖混合溶液 亚硝酸钠1.25g，葡萄糖5.0g，蒸馏水加至100ml，溶解后储存于冰箱内，可使用1个月。

2.4mol/L亚甲蓝溶液亚甲蓝15mg，蒸馏水加至100ml。

3.0.02mol/L磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠229.5mg，磷酸二氢钾52.2mg，蒸馏水加至100ml。

【操作方法】

1.在枸橼酸钠抗凝血2ml的试管中加入20mg葡萄糖，混匀，2 000r/min离心5min。弃去部分血浆，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀备用。取上述抗凝血lml，加亚硝酸钠葡萄糖混合液和亚甲蓝溶液各0.05ml，充分颠倒混合，使与氧气充分接触，加塞后放37℃水浴中3h。然后取孵育后的血0.1ml，加pH 7.4磷酸盐缓冲液10ml，混匀放置2min，波长635nm处测定吸光度为SA。同样取未加亚硝酸钠葡萄糖混合液和亚甲蓝溶液的孵育标本0.1ml，加入pH 7.4的磷酸盐缓冲液10ml，混匀后放置2min，用分光光度计检测吸光度为B。再加入亚硝酸钠葡萄糖混合液1滴，混匀后放5min，再测定其吸光度为St，此为高铁血红蛋白对照。

2.计算 高铁血红蛋白还原率（%）＝

【参考值】　正常人高铁血红蛋白还原率≥75%；脐血77%。

【临床意义】　蚕豆病和伯氨喹（伯氨喹啉）型药物溶血性贫血患者由于G6PD缺陷，高铁血红蛋白还原率明显下降，G6PD中度缺乏者（杂合子）还原率多在31%～74%，G6PD严重缺乏者（纯合子）常在30%以下。

【注意事项】　红细胞比积过低＜30%时，高铁血红蛋白还原率显著降低须调整红细胞与血浆的比例。实验试管要消毒无菌，污染细菌可能产生亚硝酸盐而造成假阳性。不稳定Hb分子结构改变，稳定性减低，易被氧化而造成假阳性。