【摘要】: 在二磷腺苷存在的条件下,丙酮酸激酶可使磷酸烯醇丙酮酸转化成丙酮酸。生理盐水洗涤3次,配成20%红细胞悬液。小试管中加0.2ml反应液,加上述红细胞悬液20μl,37℃水浴,在开始反应和反应20、30及60min各取一滴微量混合液点样在滤纸上,晾干后置紫外灯下观察荧光结果。 荧光斑点不消失或时间延长说明丙酮酸激酶缺乏,中间缺乏者(杂合子)时,荧光25~60min消失,严重缺乏者(纯合子)时,荧光60min不消失。
【原理】 在二磷腺苷存在的条件下,丙酮酸激酶(PK)可使磷酸烯醇丙酮酸(PEP)转化成丙酮酸。通过乳酸脱氢酶(LDH)的作用又转化为乳酸,同时把有荧光的还原型辅酶I(NADH)氧化为无荧光的辅酶I(NAD),因为NADH有荧光,在紫外光下荧光消失的时间可反映PK的活性。
【试剂】
1.0.15mol/LPEP液。
2.0.015mol/LNADH。
3.0.08mol/L硫酸镁溶液。
4.0.25mol/L磷酸盐缓冲液。
5.0.03mol/LADP液。
6.反应液(现用现配),0.15mol/L PEP 30μl、0.015mol/L NADH 0.1ml、0.08mol/L硫酸镁溶液0.1ml、0.25mol/L磷酸盐缓冲液0.05ml、0.03mol/L ADP液0.1ml、蒸馏水0.62ml。
【操作方法】 肝素抗凝血2ml,2 000r/min离心5min,弃去血浆和乳白色层。生理盐水洗涤3次,配成20%红细胞悬液。小试管中加0.2ml反应液,加上述红细胞悬液20μl,37℃水浴,在开始反应和反应20、30及60min各取一滴微量混合液点样在滤纸上,晾干后置紫外灯下观察荧光结果。
【参考值】 正常人开始有荧光,一般在20min内消失。
【临床意义】 荧光斑点不消失或时间延长说明丙酮酸激酶(PK)缺乏,中间缺乏者(杂合子)时,荧光25~60min消失,严重缺乏者(纯合子)时,荧光60min不消失。
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