血红蛋白电泳检测

【原理】　各种血红蛋白由于等电点不同，在同一pH缓冲液中，所带的电荷有差异，因而在同一电场下，一定时间内即可分成各种区带。在pH8.6缓冲液中它们均由负极端向正极端移动，从电泳图谱中可初步鉴别出各种正常、异常血红蛋白，并用光电比色求得其含量。

【试剂】

1.pH8.6TEB缓冲液 Tris10.29g、EDTA0.6g、硼酸3.2g，加蒸馏水至1 000ml。

2.硼酸盐缓冲液 硼砂6.87g、硼酸5.56g，加蒸馏水至1 000ml。

3.丽春红染液 丽春红S 0.1g、二氯醋酸1.4g，加蒸馏水至100ml。

4.漂洗液 3%醋酸。

【操作方法】

1.异常血红蛋白筛选 将乙酸纤维素薄膜浸入等体积TEB和巴比妥缓冲液的混合液中，完全浸透至少20min。取出后用滤纸吸去多余浸泡液，吸取血红蛋白液2μl，垂直点加乙酸纤维素薄膜（毛面）距一端边缘1.5cm处。将电泳缓冲液（硼酸盐缓冲液）倒入电泳槽中，将点样后的醋酸纤维薄膜，毛面向下放在电泳槽架上，点样端在阴极，以四层纱布作盐桥。电压200～250V，电泳20～30min，同时做正常对照。将电泳带浸入丽春红染液中浸泡10min，移入3%醋酸溶液脱色至背景无色，肉眼观察结果。

2.血红蛋白定量测定 血红蛋白液的制备、浸膜、电泳同前所述。点样量为20μl，染色时间为30min。分别剪下各区带，放入0.4mol/L NaOH溶液中，不时摇动，直到血红蛋白被完全洗脱下来。用空白管调零，波长600nm测定吸光度。

3.计算 以HbA2为例HbA2（%）＝

【参考值】　正常血红蛋白电泳区带HbA 96%～98%、HbF 1%～2%、HbA21.2%～3.5%。

【临床意义】　pH8.6TEB缓冲液醋酸纤维薄膜电泳适合检出HbA、HbA2、HbS、HbC、HbF。HbA2增多时，见于β珠蛋白生成障碍性贫血，为轻型β-地中海贫血重要实验室诊断指标。HbA2轻度增加还可见于肝病、肿瘤和某些血液病。对各泳速相同或相近的异常血红蛋白，特别是新发现的异常血红蛋白和珠蛋白生成障碍性贫血的新类型时，必须进一步做其他相关的实验室检查，并根据临床综合分析。

【附】　血红蛋白液的制备：草酸盐或肝素抗凝血3ml。2 000r/min离心10min，弃去上层血浆。以红细胞8倍体积的生理盐水洗涤3次，每次以2 000r/min离心5min，最后以4 000r/min离心10min，尽量吸去上清液，记录压积红细胞量。加入等量蒸馏水，充分振摇，使完全溶血，随后加入红细胞一半体积的四氯化碳或氯仿，用力振摇5min左右。4 000r/min离心20min，将上层清晰的血红蛋白液吸出，4℃保存备用。