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抗碱血红蛋白检测

时间:2022-06-30 百科知识 版权反馈
【摘要】: 胎儿血红蛋白及某些异常血红蛋白具有比HbA更强的抗碱作用,将待检溶血液与0.083mol/L氢氧化钾作用lmin,因HbF抗碱变性作用强不发生变性,没有变性存在于上清液中。HbA变性沉淀,取上清液测定吸光度,可检测出抗碱血红蛋白的浓度。加入0.1ml 10%血红蛋白液,立即计时,并迅速摇动。β-地中海贫血患者抗碱血红蛋白明显增高,重型患者可达80%~90%。急性白血病、再生障碍性贫血、红白血病、淋巴瘤等也可轻度增高。

【原理】 胎儿血红蛋白(HbF)及某些异常血红蛋白具有比HbA更强的抗碱作用,将待检溶血液与0.083mol/L氢氧化钾作用lmin,因HbF抗碱变性作用强不发生变性,没有变性存在于上清液中。HbA变性沉淀,取上清液测定吸光度,可检测出抗碱血红蛋白的浓度。

试剂

1.0.083mol/L氢氧化钾溶液。

2.酸性半饱和硫酸铵溶液 硫酸铵饱和液加等体积的蒸馏水,再加入1mol/L的盐酸溶液。

【操作方法】

1.取1.6ml 0.083mol/L氢氧化钾溶液于试管内,25±1℃水浴10min。加入0.1ml 10%血红蛋白液,立即计时,并迅速摇动。碱化lmin时,加入3.4ml酸性半饱和硫酸铵溶液中止反应,迅速颠倒混匀六次,过滤后取滤液检测吸光度(A),取5ml蒸馏水加入10%血红蛋白液0.02ml作为对照管,测定吸光度为(B),以蒸馏水作空白管波长为540nm进行比色测定。

2.计算 抗碱血红蛋白(%)=

【参考值】 2岁以上的正常人<2%,新生儿55%~85%。

【临床意义】 此试验也称为碱变性试验,检测的是抗碱血红蛋白,除HbF外,Hb Barts和部分HbH也具有抗碱能力,需通过电泳鉴别。β-地中海贫血患者抗碱血红蛋白明显增高,重型患者可达80%~90%。急性白血病、再生障碍性贫血、红白血病、淋巴瘤等也可轻度增高。

【注意事项】 血红蛋白溶液制备见血红蛋白电泳测定。本试验需严格掌握碱液浓度、碱化时间、温度等条件。

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