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热变性试验

时间:2024-06-30 百科知识 版权反馈
【摘要】: 根据不稳定血红蛋白比正常血红蛋白更容易不耐热的特性,观察血红蛋白液在50℃时是否出现沉淀,对不稳定血红蛋白进行筛检。用0.1mlTris溶液加5ml氰化高铁血红蛋白稀释液为空白管调零,波长540nm测定各管吸光度。 沉淀血红蛋白>5%时,提示存在不稳定血红蛋白。此外HbF、HbH、HbE含量增高时,及G6PD缺陷和α-地中海贫血时结果均偏高。

【原理】 根据不稳定血红蛋白比正常血红蛋白更容易不耐热的特性,观察血红蛋白液在50℃时是否出现沉淀,对不稳定血红蛋白进行筛检。

试剂

1.pH 7.4的0.1mol/LTris缓冲液

2.氰化高铁血红蛋白稀释液 碳酸氢钠1g,氰化钾50mg,高铁氰化钾200mg,加蒸馏水至1 000ml。

【操作方法】

1.取pH 7.4的0.1mol/LTris缓冲液5ml加入新鲜配制的血红蛋白液0.5ml,混匀。将上述液分别各取2ml,一支对照管放4℃,另一支测定管放50℃水浴,2h后,将两支试管1 000r/min离心20min。每管取0.1ml上清液,各加5ml氰化高铁血红蛋白稀释液,混合。用0.1mlTris溶液加5ml氰化高铁血红蛋白稀释液为空白管调零,波长540nm测定各管吸光度。

2.计算:不稳定血红蛋白百分率(%)=

【参考值】 正常人不稳定血红蛋白<5%。

【临床意义】 沉淀血红蛋白>5%时,提示存在不稳定血红蛋白。此外HbF、HbH、HbE含量增高时,及G6PD缺陷和α-地中海贫血时结果均偏高。

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