淋巴细胞动力学检测

（一）用51Cr标记淋巴细胞的淋巴细胞动力学

【原理】　用放射性核素51Cr标记淋巴细胞，静脉回输给受检者，计算不同时间段的淋巴细胞数。

【试剂】

1.塑料袋含ACD-A液30ml。

2.淋巴细胞分离液（1ymphoprep）。

3.51Cr-铬酸钠，18.5MBq/ml。

4.99 Tc-过锝化物（99mTc）约185MBq/ml。

5.用99mTc标记红细胞的试剂盒（TCK-11）。

6.8-羟喹啉（oxine）。

7.6.9mol/L tris-氯化铵溶液，用作红细胞溶解剂。

8.小牛血清。

9.KAC-2（硅胶5%PBS混悬液）。

10.绵羊红细胞。

【操作方法】

1.分离T及B淋巴细胞。采血30ml，加1/10体积的羰基铁，37℃温育，使单核细胞进行吞噬。将此血液层置于淋巴细胞分离液表层，以密度离心法分离获得淋巴细胞。

2.取小牛血清18ml加入绵羊红细胞悬液2ml，加入淋巴细胞悬液中，1 000r/min离心10min，4℃放置30min。然后尽可能轻地使沉降细胞再悬浮，将此悬液置于淋巴细胞分离液表层，以2 500r/min离心30min，T淋巴细胞形成玫瑰花环并沉淀，在分离液与血清之间的界面层是B淋巴细胞。用6.9mol/L tris-氯化铵溶液使沉降部分的绵羊红细胞溶解，用生理盐水洗涤2次，得到T淋巴细胞，B淋巴细胞亦用生理盐水洗涤2次。

3.将所得的T淋巴细胞或B淋巴细胞悬浮于生理盐水2ml中。

4.加51Cr 18.5MBq，37℃温育30min，用生理盐水洗涤2次，加生理盐水制成悬液20ml，保留一部分作标准对照，其余静脉回输给受检者。

5.回输后，于5min，30min，1h，3h，6h，10h，第1～10天，按时采血，用淋巴细胞分离液分离细胞，最后制得悬液2ml，计算所得的淋巴细胞数。

6.淋巴细胞动力学各参数按下列公式计算：

回收率（recovery）：标记的淋巴细胞给药即刻（0时）在末梢血中的比例（1%）。

注：＊采用51Cr标记红细胞法测定。

淋巴细胞消失曲线（1ymphocyte disappearance cu rve）：淋巴细胞从末梢血中呈指数函数减少。

T1/2由两部分组成：数小时减少的第一相和数目减少的第二相。第一相及第二相在0时间的放射能分别为T0和Te。

血淋巴细胞池（BLP）

式中：RLP——再循环淋巴细胞池。

式中：LTR——淋巴细胞周转率。

【正常参考值】　正常人的T及B淋巴细胞的寿命是呈指数函数下降的双相性曲线。T淋巴细胞的T1/2为0.83h与62.4h；B淋巴细胞的T1/2为0.83h与25.2h，两者特点为均具有长短两种半衰期。T淋巴细胞与B淋巴细胞相比，T淋巴细胞寿命更长。

【临床意义】　淋巴细胞动力学试验多用于实验室的研究，其临床意义尚待探讨，有学者用本试验研究恶性淋巴瘤证实淋巴细胞的再循环。

（二）99mTc标记的淋巴细胞在脏器中分布的检查

与51Cr标记法相同。将无菌分离的淋巴细胞用99mTc标记后，回输给受检者，检测其淋巴细胞的转归及脏器分布。在淋巴细胞生理盐水悬液中，加入99mTc标记用试剂（TCK-11）1.5ml（用SnCl2·2H2O 0.9μg作还原剂），室温置5min。用生理盐水洗涤1次，将T或B淋巴细胞置生理盐水5ml中，使之再成悬液。加入99mTc-过锝化物185MBq，37℃温育10min，然后用生理盐水洗涤3次，最后用生理盐水20ml使成悬液。将99mTc标记的淋巴细胞回输给受检者，同时用γ-扫描仪观察其在脏器中的分布。

正常参考值与临床意义与用51Cr标记淋巴细胞的淋巴细胞动力学相同。