血浆组织型纤溶酶原活化剂的检测

血浆纤溶酶原活化剂（plasminogen activator，PA）具有将纤维蛋白酶原分解为纤维蛋白酶、激活纤溶系统的生理作用。最重要的是组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator，t-PA），它诱导循环纤维蛋白的凝血块溶解，另外还有尿激酶型纤溶酶原激活物，通过与特殊的细胞受体结合，引起与细胞结合的纤维蛋白原活化。纤溶系统的主要成分是纤溶酶原，它是一种无活性的酶原，转变为有活性的酶后，参与纤维蛋白与各种细胞外基质蛋白的降解。t-PA最早发现于循环中，可以诱导纤维蛋白凝块降解；t-PA从血管内皮持续释放，这是静脉阻塞、高强度的体力活动或作用于血管的药物，如儿茶酚胺类刺激的结果。它们会使t-PA在几分钟内迅速升高。由于t-PA快速的肝脏清除率和其有效地与PAI-1形成无活性的复合物，在循环中的半衰期仅为5min。与其他止血酶相比较，t-PA不以无活性的酶原形式释放，而是以有活性的蛋白酶形式释放，对循环血浆中游离的纤溶酶原的亲和力很低。

（一）血浆组织型纤溶酶原活化剂活性检测

【原理】　血浆组织纤溶酶原活化剂活性检测（tissue plasminogen activator activity，t-PA：A）检测，发色底物法：血浆优球蛋白部分含有t-PA及全部凝血因子，但不含PAI。受检血浆加入过量纤溶酶原和纤维蛋白共价物，血浆中的t-PA吸附于纤维蛋白上，并使纤溶酶原变成纤溶酶，纤溶酶使发色底物S-2251释放出PNA而显色，显色的深浅与受检血浆中t-PA的含量呈正相关。方法学略。

【参考值】　300～600U/ml。

【临床意义】　t-PA随年龄的增加而增高，随剧烈运动、应急反应而增高，因此在检测时要充分考虑这些因素。t-PA活性测定较利用免疫方法测定抗原含量要准确，但可受多种因素的影响（溶血、饮食、采血等）。另外t-PA的检测亦可广泛应用于溶栓治疗的监测中，一般要求，静脉注射t-PA 10～20min后，血浆t-PA活性或含量以达到参考值的2～3倍为最佳。

1.增高 表明纤溶活性亢进，见于原发性纤溶和继发性纤溶，如DIC，也见于应用纤溶酶原激活剂类药物。

2.减低 表示纤溶活性减弱，见于高凝状态和血栓性疾病。另外也见于高脂血症、手术损伤及口服避孕药。

（二）血浆组织型纤溶酶原活化剂抗原检测

【原理】　血浆组织型纤溶酶原活化剂抗原（tissue plasminogen activator antigen，t-PA：Ag）测定，ELISA法：用纯化的多克隆或单克隆抗t-PA抗体包被在固相载体上温浴。然后加入受检样本，其中的t-PA抗原与固相载体上的抗体形成复合物，该复合物可与过氧化物酶标记的二抗起抗原抗体结合反应，形成的多重复合物可使邻苯二胺呈色，其深浅与受检标本中的t-PA抗原含量成正比。方法学略。

【参考值】　1.5～10.5μg/L。

【临床意义】　同t-PA：A测定，但与t-PA抗原含量增高相反，抗原含量降低往往是不明显的，其中主要原因是因检测中使用的抗体质量不高，检测内容包含了游离型t-PA和复合型t-PA（Fg-t-PA-PLG）的检测，也可能与血中的嗜异性抗体、类风湿因子有交叉反应。

【问题和注释】　血液采集t-PA的测定时间应该定于早晨8：00～10：00，在采血前病人至少应先休息20min，这是因为体力活动的增加会导致t-PA释放增加。