检测病毒抗原

上述细胞培养分离病毒过程复杂，技术要求高，直接检测病毒抗原快速而实用。检测病毒抗原一般为免疫测定方法，用病毒特异性抗体区别病毒抗原与宿主细胞抗原，不要求完整细胞体的存在，因此即使标本送检时间长，病毒体已被破坏时仍可作出诊断。以下简单介绍几种常用方法：

（一）免疫荧光或免疫过氧化物酶技术

免疫荧光技术是将带荧光染料的特异性抗体与待测标本中的病毒抗原结合，通过观察荧光检测病毒抗原的存在。常用的荧光染料是异硫氰荧光素（发绿色荧光）和罗丹明B（发红色荧光）。荧光素标记的抗体可用于直接或间接测定临床标本或感染细胞培养物中的病毒抗原。直接法较快，但敏感性较间接法低。免疫过氧化物酶技术与免疫荧光技术的原理相同，但其耦联物是酶，最常用的是辣根过氧化物酶。酶联物与病毒感染细胞结合，通过加入底物联苯二胺，在过氧化氢的作用下产生持久的棕色，通过肉眼或显微镜可观察到反应。

（二）酶联免疫吸附试验

常用双抗夹心法：将病毒特异性抗体吸附在固相载体，如微孔板上，加入待测标本孵育，洗涤后加入酶标记的特异性抗体孵育，形成带酶的抗原抗体复合物，洗涤后加入底物显色，肉眼或分光光度计做定性或定量分析。试验中最常用的酶是辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。此法敏感性高、特异性强、仪器设备简单，且无放射性核素的危险，因而被广泛应用。

（三）放射免疫试验

此技术除了病毒特异性抗体是用放射性核素标记代替了酶标以外，其他基本同酶联免疫吸附试验。该技术敏感性高且重复性好，但放射性物质的危害性限制了其应用。

（四）乳胶凝集试验

其原理是根据小珠可被病毒特异性抗体包被，与标本中的病毒抗原结合，使小珠凝集，并可在显微镜下观察到反应。此方法敏感性较酶联免疫吸附试验差，但十分简单、快速，仅需2～20min。