【摘要】：细胞无菌分选比较容易便捷的获得高纯度，高活性的细胞。回收的细胞在无菌的条件下可继续培养。
（一）实验目的
利用流式细胞仪把标记上荧光的细胞从其他细胞中区分出来，进行培养、分析或其他生物学研究。细胞无菌分选比较容易便捷的获得高纯度，高活性的细胞。回收的细胞在无菌的条件下可继续培养。
（二）仪器试剂
1.流式细胞仪 波长选择：488nm、405nm。
2.特定荧光抗体。
3.4%BSA溶液 使用1×PBS作为溶剂；无菌的4%BSA包埋收集管；无菌鞘液。
（三）实验流程
实验过程基本同上，但存在以下不同。
1.分选后的细胞还需要继续培养，需要预先用无菌的4%BSA包埋收集管（在无菌收集管中，加满4%BSA，并放置于4℃至少1h，使用前倒掉包埋液）。
2.所有用到的试剂，包括鞘液，都必须无菌处理；在分选前及分选过程中，必须进行严格无菌操作，机器需要经过乙醇冲洗及无菌PBS冲洗的过程。
（四）细胞分选及无菌分选注意事项
1.若所要分选的是悬浮细胞，要求细胞总数大于1×107/管，直接收集细胞液。
2.必须有对照细胞。如需要筛选的是GFP阳性的细胞，必须提供没有转染的同种细胞。
3.在前期准备工作中一定要保持环境、仪器管路无菌。紫外灯消毒外部环境，鞘液高压灭菌，管路乙醇冲洗后要用无菌鞘液反复冲洗。必要时可在培养时加适量抗生素。
（五）分选
1.分选获取示意图，见图1-18。
2.分选通道选择示意图，见图1-19。
图1-18 收集管获取分离细胞
图1-19 淋巴细胞分型
可根据A图中不同通道的设定来分选出想要的细胞群（B），R1.（CD3-CD4-）细胞；R2.（CD3+CD4-）细胞；R3.（CD3+CD4+）细胞；R4.（CD3-CD4+）细胞
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