（一）实验目的及原理
尼罗红（Nile red）是一个理想的脂肪染色剂，它只在疏水环境中显示很强的荧光。采用尼罗红荧光标记法可检测细胞内脂肪的含量及分布。
（二）主要实验材料
Nile red染料，PBS，共聚焦专用petri皿等。
（三）实验流程
1.将细胞种于petri皿上。
2.将Nile red溶于丙酮中得到浓度为10μg/ml、100μg/ml或1000μg/ml的储备液，分装避光保存。
3.固定 用1.5%戊二醛（PBS稀释）固定5min。
4.PBS洗涤5min×3。
5.染色 如果是不贴壁细胞用PBS悬浮，贴壁细胞用PBS浸没，Nile red储存液按比例倍比稀释直接加入细胞中，使其终浓度为100ng/ml或1μg/ml，孵育5min。
6.PBS洗涤5min×3，加入2mlPBS，上镜观察。
7.启动共聚焦显微镜，选择488nm与543nm双激发，590nm与630nm双通道检测。
8.每个样品随机选取4～5个视野，共计50个细胞，存储图像，用于定量测定其荧光强度和脂肪分布面积。
9.统计处理 根据组别荧光强度的变化，统计脂肪分布的区域、面积、含有脂肪的细胞数等指标。
10.注意 染色时浸泡细胞的溶液不能含有血清或白蛋白，因为这些物质能将Nile Red从细胞中提取出来；样品染色后应立即上机观察，以免荧光淬灭。
（四）典型举例
脂肪颗粒的染色示意图，见图1-26。
图1-26 绿藻细胞脂肪颗粒染色（×600）
黄色代表脂肪颗粒
参考文献
[1]Paddock SW.Confocal microscopy Methods and Protocols.New Jersey:Humana Press,1999:59-73.
[2]Haugland RP.The Handbook-A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies ,10th ed.Eugene,OR:Molecular Probes,2005：chapter13.
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