【摘要】：ER-TrackerTMBlue-White DPX染料，Hank’s液，共聚焦专用petri皿等。固定后用HBSS洗涤2～3次，每次5min，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，最后封片观察。[1]Haugland RP.The Handbook-A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies,10th ed.Eugene,OR:Molecular Probes,2005:chapter 12.
（一）实验目的
观察细胞内质网结构。
（二）主要实验材料
ER-TrackerTMBlue-White DPX（1mol/L储存液）染料，Hank’s液（HBSS），共聚焦专用petri皿等。
（三）实验流程
1.细胞在共聚焦专用培养皿中培养，生长70%～80%融合。
2.细胞用HBSS液洗3次。
3.用HBSS稀释ER-Tracker，使其终浓度为100nmol/L～1μmol/L，37℃预热，每皿细胞加入100μl，使其覆盖中间玻璃片。
4.37℃5%CO2孵箱培养30～120min。
5.HBSS液洗3次后，孵箱中放置10min。
6.共聚焦显微镜选择激发波长587nm激光，选择615nm（红色）通道观察。
7.设置仪器参数，扫描获得清晰图像。
（四）注意事项
1.如需固定，可以使用4%甲醛37℃固定2min。固定后用HBSS洗涤2～3次，每次5min，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，最后封片观察。
2.ER-Tracker染色的细胞不能用Triton X-100透化，Triton X-100透化处理会导致ER-Tracker的荧光染色消失。
（五）典型举例
血管内皮细胞的内质网的位置，见图1-28。
图1-28 血管内皮细胞内质网染色
绿色代表内质网；橘红色代表线粒体（×600）
参考文献
[1]Haugland RP.The Handbook-A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies,10th ed.Eugene,OR:Molecular Probes,2005:chapter 12.
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