细胞内线粒体染色及检测

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【摘要】：Mitotracker green FM染料，PBS溶液，4%多聚甲醛，共聚焦专用petri皿等，人胚肺成纤维细胞。启动计算机，运行FV10-ASW2.1扫描软件，扫描图像。[1]Paddock SW.Confocal Microscopy Methods and Protocols.New Jersey:Humana Press,1999:59-73.[2]Haugland RP.The Handbook-A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies,10th ed.Eugene,OR:Molecular Probes,2005:chapter 12.

（一）实验目的

细胞线粒体染色及检测方法。

（二）主要实验材料

Mitotracker green FM染料，PBS溶液，4%多聚甲醛（paraformaldehyde，PFA），共聚焦专用petri皿等，人胚肺成纤维细胞（WI-38）。

（三）实验流程

1.培养WI-38细胞，传代至共聚焦专用petri皿中，待细胞长至70%～80%为宜。

2.将储备的Mitotracker green FM（浓度为1mmol/L，-20℃避光保存）荧光探针用PBS液稀释，终浓度100～200nM。注：根据细胞种类不同，此终浓度可调。

3.4%PFA室温固定30min，PBS洗涤5min×3。

4.含0.2%的TPBS室温透化10min，PBS洗涤5min×3。

5.加入配好的探针稀释液100μl/皿，使探针稀释液完全覆盖皿中间玻璃小孔。

6.37℃孵箱孵育20min。

7.PBS洗涤5min×3次，加入2mlPBS，然后上镜观察。