【摘要】：传统的显微镜只能形成二维的彩色图像，激光扫描共聚焦显微镜通过对同一样品不同层面的实时扫描成像，进行图像叠加构成样品的三维结构图保存。它的优点是可以通过一系列的层面图像进行三维重建。活细胞分层扫描，进行三维重建和测量分析后，对细胞内微细结构的动态变化可进行定性、定量、定时和定位分析检测。绿色为肾小球基底膜；红色为Thy-1抗体；蓝色为核
（一）实验目的及原理
传统的显微镜只能形成二维的彩色图像，激光扫描共聚焦显微镜通过对同一样品不同层面的实时扫描成像，进行图像叠加构成样品的三维结构图保存。它的优点是可以通过一系列的层面图像进行三维重建。样品的立体结构分析，而且每一层面图像比普通荧光显微镜的图像结构清晰反差好。活细胞分层扫描，进行三维重建和测量分析后，对细胞内微细结构的动态变化可进行定性、定量、定时和定位分析检测。
（二）实验流程
以Olympus FV1000型共聚焦显微镜为例。
1.预扫描找到适宜标本（图像信噪比较好）。
2.选择Z轴扫描。
在Z扫描界面中设置合适的上平面、下平面和扫描间隔。
3.执行XYZ扫描。
4.得到图像后，点击图像展示模式按钮，可以在下面选项中选择三维展示模式看各层切面情况。
5.也可以点击三维重建按钮来展示三维重建效果，拖动鼠标以一定的角度观察图像。
6.观察三维图像的某个横截面。
（1）动画播放。
（2）动态旋转图像保存。
Start：开始角度
End：结束角度
Frame/s：旋转速度
Interval：单次旋转的角度
（三）典型举例
图1-45 Thy-1肾炎肾小球三维重建（×800）
绿色为肾小球基底膜（Glomerular basement membrane，GBM）；红色为Thy-1抗体；蓝色为核（DAPI标记）
[1]FV1000user manual.OLYMPUS.INC.2010.
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