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石蜡包埋和塑料包埋技术

时间:2024-07-01 百科知识 版权反馈
【摘要】:常规的石蜡包埋过程包括5个基本步骤、即固定、脱水、透明、浸蜡和包埋。全自动石蜡包埋机包埋组织,采用金属包埋框盒。

(一)石蜡包埋技术

石蜡包埋技术制作石蜡切片,切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中,而水与石蜡又是不相混合的,所以在浸蜡、包埋前必须将组织内所含的水分脱去。常规的石蜡包埋过程包括5个基本步骤、即固定、脱水、透明、浸蜡和包埋。

1.脱水 是用脱水剂完全除去固定好的组织内的水分,为下一步透明及浸蜡创造条件。此外,脱水还可以使组织再次形成一定的硬化。一般情况下,组织需要经过75%,85%,95%,100%乙醇的脱水程序。脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同确定。脱水一定要充分、彻底。

2.透明 纯乙醇不能与石蜡相溶,还需用能与乙醇和石蜡相溶的媒浸液,替换出组织内的乙醇。组织在这类媒浸液中浸渍,出现透明状态,此液即称透明剂,透明剂浸渍过程称透明。二甲苯和氯仿是常用的透明剂。组织在氯仿和二甲苯中不宜放置过久,否则会造成组织脆硬,不利切片。

3.浸蜡 组织经透明剂的透明作用之后,移入熔化的石蜡内浸渍,石蜡逐渐浸入组织间隙,取代透明剂,这一程序就叫浸蜡。根据所用石蜡的熔点,浸蜡需要在60~62℃温箱内进行。为了尽可能排除透明剂,浸蜡可以分两缸进行。浸蜡时间应根据组织种类,组织块大小,厚薄确定,一般为1~4h。

4.包埋 是将已经经过固定、脱水、透明、浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出,置入充满熔化石蜡的包埋框内,包埋成块,使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却,这个程序称为包埋。包埋剂凝固后,进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。全自动石蜡包埋机包埋组织,采用金属包埋框盒。通常石蜡采用熔点为60~62℃,包埋机设定温度64~65℃,先把组织材料放置于金属包埋框底,石蜡放满于金属包埋框内,组织用弯头镊子平整调整到底部,若镊子上的石蜡凝固,在乙醇灯上烤(温度不宜过高,以石蜡熔化为宜,否则将损坏组织)。组织长径尽量与包埋框盒长径垂直,在石蜡表面发白时,放置塑料蜡块托(边上用铅笔标记病理号),按四角压紧。待石蜡完全凝固后取出组织蜡块。

(二)塑料包埋技术

用塑料包埋切片能制备高质量的组织切片,与石蜡切片相比,具有细胞收缩小、结构清晰、分辨力高等优点,但操作复杂。

1.取材要求修成2mm厚的薄片。

2.固定10%中性福尔马林液。根据标本大小固定时间为2~4h。

3.组织块脱水用梯度乙醇(80%、95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ)。较大的组织每步30min;中等组织每步15min;小组织每步5min。

4.浸透取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯(HEMA)95ml,聚乙二醇(PEG-400)8ml,过氧化苯甲酰0.7g,混匀溶解后置于棕色瓶,4℃备用。浸透时间为24~48h,其间更换一次浸透液。

5.包埋A液,即浸透液;B液,即PEG-40020ml,N-N二甲基苯胺1ml混合,摇匀溶解后置于棕色瓶,4℃备用。包埋剂必须在使用前配制,按A、B二液以100∶3的比例混合,稍加搅拌便可使用。经浸透的组织块置于塑料模具内,注入包埋剂,放置30~60min(室温高于18℃可放置于冰箱中),待包埋剂完全渗入组织后,在包埋模具上加盖,在室温中放置,使其聚合,成型后便可切片。

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