免疫组织化学双重染色能够在同一张组织切片上区别显示多种抗原的存在和分布情况，所提供的信息是普通单染组织切片的数倍，清楚显示各种抗原的组织定位和分布相关性。
（一）实验步骤
1.石蜡切片常规脱蜡入水。
2.入3%的H2O24℃孵育10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
3.入PBS洗2～3min。
4.加0.05%胰酶37℃20min。
5.入PBS洗2～3min。
6.血清室温封闭，10～20min。
7.加一抗室温或4℃过夜。
8.入PBS洗2～3min。
9.加生物素标记的二抗工作液室温20～40min。
10.入PBS洗2～3min。
11.加碱磷酶标记抗体工作液室温20～40min。
12.入PBS洗2～3min，显色剂BCIP/NBT发色5～10min。
13.加一抗室温或4℃过夜。
14.入PBS洗2～3min，加生物素标记的二抗工作液室温20～40min。
15.入PBS洗2～3min，加辣根酶标记链酶卵白素工作液室温20～40min。
16.入PBS洗2～3min，显色剂DAB发色5～10min。
17.自来水洗，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片（图3-14）。
图3-14 ED-1（黄色）+ICAM-1（蓝色）（×200）
参考文献
[1]Tu X,Chen X,Xie Y,et al.Anti-inflammatory Renoprotective Effect of Clopidogrel and Irbesartan in Chronic Renal Injury.J Am Soc Nephrol,2008,19:77-83.
[2]Xu G,Chen X,Wu D,et al.Development of High-specificity Antibodies against Renal Urate Transporters Using Genetic Immunization.J Biochemmol Biol,2006,39:696-702.
[3]李建军，陈香美，顾玥，等.复方肾华片对5/6肾切除大鼠肾组织巨噬细胞移行抑制因子的影响.中国中西医结合杂志，2005,25:150-153.
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