免疫荧光染色（直接法）

免疫荧光染色的优点是方法简单、快速、定量准确，缺点是观察设备复杂，荧光在短时间淬灭，不利于切片保存。

（一）实验步骤

1.冰冻切片4μm厚。

2.室温放置30min。

3.4℃丙酮固定10min。

4.入PBS洗2～3min。

5.加FITC标记的抗体。

6.放入湿盒中，室温孵育40min。

7.入PBS洗2～3min。

8.室温凉干。

9.甘油封片（图3-15）。

图3-15　IgG沿肾小球毛细血管襻颗粒状沉积（膜性肾病）（×400）

（二）注意事项

1.冰冻切片最好用新鲜组织，切片完成后立即进行染色。

2.滴加FITC标记的抗体后孵育要在暗盒内进行。

3.整个染色过程要避免强光直接照射切片。

4.甘油封片后尽早荧光显微镜下观察。

参考文献

[1]Zhang X,Chen X,Hong Q,et al.TIMP-1 Promotes Age-Related Renal Fibrosis Through Upregulating ICAM-1 in Human TIMP-1 Transgenic Mice.J Gerontol A Biol Sci Med,2006,61:1130-1143.

[2]Wu D,Chen X,Ding R,et al.Ischemia/Reperfusion Induce Renal Tubule Apoptosis by Inositol 1,4,5-Trisphosphate Receptor and L-Type Ca2+ Channel Opening.Am J Nephrol,2008,28:487-499.

[3]Tu X,Chen X,Xie Y,et al.Anti-inflammatory Renoprotective Effect of Clopidogrel and Irbesartan in Chronic Renal Injury.J Am Soc Nephrol,2008,19:77-83.

[4]Cai G,Chen X,Hong Q,et al.Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 exacerbated renal interstitial fibrosis through enhancing inflammation.Nephrol Dial Transplant,2008,23:1861-1875.

[5]陈荣权，陈香美，崔世维，等.基质金属蛋白酶9组织金属蛋白酶抑制物表达失衡在衰老大鼠肾小管间质损害中的意义.中华医学杂志，2004,84:937-942.

[6]蔡广研，陈仆，吴镝，等.以IgA沿肾小球毛细血管襻沉积为主的急进性肾小球肾炎.军医进修学院学报，2008,29:9-11.