【摘要】：组织细胞凋亡与免疫组织化学双重染色指同一组织切片上用TUNEL法和免疫组化同时进行标记，显示细胞凋亡和相关抗原的表达和分布情况。
组织细胞凋亡与免疫组织化学双重染色指同一组织切片上用TUNEL法和免疫组化同时进行标记，显示细胞凋亡和相关抗原的表达和分布情况。
（一）操作步骤（组织细胞凋亡显色后）
1.入3%的H2O24℃孵育10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
2.入PBS洗，加0.05%胰酶37℃孵育20min或采用微波抗原修复。
3.入PBS洗，血清室温封闭，10～20min。
4.加一抗室温或4℃过夜。
5.入PBS洗，加生物素标记的二抗工作液室温20～40min。
6.入PBS洗，加辣根酶标记链酶卵白素工作液室温20～40min。
7.入PBS洗，显色剂AEC发色5～10min。
8.自来水洗，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片（图3-22）。
图3-22 肾组织TUNEL（蓝黑色）/ICAM-1（红色）表达（×400）
（二）注意事项
1.在细胞凋亡检测过程中，严格按照试剂使用说明书进行。
2.在孵育过程中，避免组织切片干涸。
3.混匀抗体时，避免反复吹打，否则易产生气泡，影响染色结果。
[1]Qiao X,Chen X,Wu D,et al.Mitochondrial Pathway Is Responsible for Aging-Related Increase of Tubular Cell Apoptosis in Renal Ischemia/Reperfusion Injury.J Gerontol A Biol Sci Med,2005,60:830-839.
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